Эта статья опубликована сборнике научных трудов "Фундаментальные науки и практика" с материалами Третьей Международной Телеконференции "Проблемы и перспективы современной медицины, биологии и экологии" - Том 1 - №4. - Томск - 2010.

 
В настоящее время проводятся исследования по изучению факторов, влияющих на стабильность генетического материала человека с использованием микроядерного теста буккального эпителия [Ингель, 2006; Калаев, 2008; Юркин, 2002; Мейер, 2010; Юрченко, 2007], что обусловлено сравнительной простотой, быстротой и дешевизной анализа, а также отсутствием необходимости в специальном лабораторном оборудовании для культивирования клеток. Кроме того, буккальный эпителий является своеобразным «зеркалом», отражающим состояние всего организма [Гемонов,1969].
Однако эти исследования проводятся с использованием различных цитологических красителей, что может отразиться на результатах исследований. Влияние клеточных красителей на частоту встречаемости клеток с нарушениями было показано Юркиным А.Ю. [2002] и Ингель Ф.И. [2006]. В связи с этим нами была предпринята попытка изучить влияние часто употребляемых клеточных красителей (орсеина, светлого зеленого, метиленового синего, Романовского-Гимза) на частоту встречаемости аберрантных клеток.
Сбор буккального эпителия осуществляли по описанной методике Маймулова с соавт. [1998] с нашими модификациями у 10 спортсменов за 3 дня до соревнований, во время и спустя 3 и 6 дней после соревнований, возраст обследуемых лиц составлял 12-13 лет. Всего было проанализировано 141850 клеток, из них с нарушениями 1654 клетки. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета статистических программ «Stadia». Процедура группировки данных и их обработка изложены в работе Кулаичева [2006].
Нами было показано, что наиболее оптимальным типом красителя по качеству получаемых препаратов является Романовский-Гимза. При окраске этим красителем получаются наиболее чистые препараты, достаточно однородно окрашенные, ядерный аппарат по окраске отличается от цитоплазмы, клетка имеет четкие границы, при этом методика окрашивания достаточно проста и не занимает много времени.
В результате проведенных исследований было показано влияние разных типов красителей на частоту встречаемости аберрантных клеток (Р<0,001, сила влияния 2,3%), микроядер (Р<0,001, сила влияния 1,2%), перинуклеарных вакуолей (Р<0,001, сила влияния 0,5%). Влияния различных типов красителей на частоту встречаемости насечек, протрузий типа «язык» и «разбитое яйцо» показано не было.
Наибольшее количество аберраций в клетках выявляется при использовании светлого зеленого (13,8±0,8‰), орсеина (12,7±0,7‰), Романовского-Гимза (12,3±0,6‰), наименьшее при окрашивании метиленовым синим (7,9±1,0‰). Однако каждый краситель имеет свою специфику при выявлении того или иного типа нарушений (таблица).

 Таблица

Частота встречаемости аберраций в буккальных эпителиоцитах человека (‰) в зависимости от типа клеточного красителя

Оптимальным типом красителя для выявления клеток с микроядрами является Романовский-Гимза, он выявляет 6,0±0,4‰ указанных аберраций. Другие типы красителей могут выявить от 1,9±0,6‰ (окрашивание метиленовым синим) до 3,3±1,4‰ (окрашивание орсеином) нарушений.
Для выявления клеток с перинуклеарными вакуолями оптимальным типом красителя является светлый зеленый, он выявляет 10,0±0,6‰ указанных аберраций. Другие типы красителей могут выявить от 3,7±0,4‰ (Романовский-Гимза) до 6,5±0,5‰ (орсеин) нарушений.
Во всех случаях нами не было отмечено влияния индивидуальных особенностей человека на частоту встречаемости различных типов аберрантных клеток при использовании различных красителей. Т.е. один и тот же краситель окрашивает клетки разных людей одинаково.

Список литературы:
1.    Гемонов В.В. Морфология и гистохимия слизистойистой оболочки полости рта в норме и при некоторых патологических состояниях в эксперименте: Автореф. Дис… докт. мед. наук. - М., 1969. - 39 с.
2.    Ингель Ф.И. Перспективы использования микроядерного теста на лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях цитокинетического блока. Часть 2. Факторы среды и индивидуальные особенности в системе оценки нестабильности генома человека. Дополнительные возможности теста. Методика проведения экспериментов и цитогенетического анализа / Ф.И. Ингель // Экологическая генетика. -2006. –Т.4, №4. –С.38-50.
3.    Калаев В.Н. Оценка генотоксичности окружающей среды в городах республики Молдова по результатам микроядерного теста в буккальном эпителии детей / В.Н. Калаев, А.К. Буторина, М. В. Левински, и [др.] // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. – 2008. – Т.7, № 1. – С. 196-200.
4.    Кулаичев А.П. Методы и средства комплексного анализа данных / А.П. Кулаичев. - М.: ФОРУМ: ИНФА-М, 2006. - 512 c.
5.    Маймулов В.Г. Цитогенетические нарушения в соматических клетках у детей, проживающих в районах с различной интенсивностью загрязнения окружающей среды / В.Г. Маймулов, Л.В. Китаева, Т.В. Верещагина, и [др.]  // Цитология. -1998. –Т.40, №7. –С. 686-689.
6.    Мейер А.Б. Генотоксические и цитотоксические эффекты в буккальных эпителиоцитах детей, проживающих в экологически различающихся районах Кузбасса / А.Б. Мейер, В.Г. Дружинин, А.В. Ларионов // Цитология. – 2010. – Т.52, №4. – С. 305-310.
7.    Юркин А.Ю. Методические особенности анализа микроядер в клетках человека и животных при экологической оценке состояния окружающей среды: Автореф. Дис. … канд. мед. наук / А.Ю.Юркин  – Томск, 2002. – 22 с.
8.    Юрченко В.В. Микроядерный тест на буккальных эпителиоцитах человека / В.В. Юрченко // Полиорганный микроядерный тест в эколого-гигиенических исследованиях / Под ред. Ю.А. Рахманина, Л.П. Сычевой. – М.: Гениус, 2007. – 312 с.