В поддержании структурной целостности эритроцитов важное значение имеют внутренние примембранные белковые слои, взаимодействие которых с мембранами взаимно обусловлено. Считается, что модификация мембраны и содержащегося в ней гемоглобина сопровождается изменением механических свойств мембраны и эритроцитов в целом [1]. Низкая деформируемость последних способствует их разрушению в сосудах микроциркуляции и кроверазрушающих органах. Учитывая важность выявления факторов, влияющих на физиологическую сохранность эритроцитов при гемолитической анемии, целью нашего исследования явилось определение содержания мембранно-связанного гемоглобина (МСГ) при воздействии различных гемолитических агентов - нитрита натрия (НН), солянокислого фенилгидразина (ФГ).

Материал и методы. Экспериментальным животным (крысы-самцы) однократно внутрибрюшинно вводили 0,6% раствор НН (90 мг/кг - DL50) либо 2,0% раствор ФГ (150 мг/кг - DL50). Исследовали гепаринизированную кровь (50 ЕД/мл), полученную методом декапитации через 1,5 ч; 1; 3; 5; 7 сут после введения веществ. Контрольным животным вводили эквивалентное количество физиологического раствора. Количество животных в группах - 6.
Определяли в крови: количество эритроцитов, содержание гемоглобина, ретикулоцитов, гематокрит. Об относительном содержании МСГ в эритроцитах судили по спектроскопической убыли дериватов гемоглобина из гемолизатов после центрифугирования их при 6500 об/мин в течение 30 мин [2]. Измеряли экстинкции при 536, 572 и 630 нм («Specord M40»). По разности экстинкций при соответствующих длинах волн до и после центрифугирования вычисляли индекс МСГ (у. е. ) в виде отношения конечной экстинкции к исходной, причем снижение индекса свидетельствовало о повышении МСГ в гемолизатах и, следовательно, в мембранах эритроцитов. Результаты обработаны статистически с использованием t-критерия Стьюдента (достоверность различий считали при р<0,05).

Результаты и обсуждение. Количественные показатели красной крови были снижены в течение 1-х сут после введения НН с максимальными изменениями через 1,5 ч: количество эритроцитов снижалось на 14% (р<0,05), общего гемоглобина - на 18% (р<0,05), гематок-рита - на 12% (р<0,05) в сравнении с соответствующими контрольными значениями. На 3-и сут отмечалось повышение содержания рети-кулоцитов практически в 3 раза относительно значений контроля. Введение ФГ вызывало более выраженную и продолжительную анемию в течение 13 сут наблюдения с наибольшим проявлением на 3-и сут эксперимента, сопровождавшимся снижением числа эритроцитов на 65%, гемоглобина на 78%, гематокрита - на 65%, увеличением содержания ретикулоцитов практически в 10 раз.
Отмечалось повышение уровня МСГ в эритроцитах. Так, для нитритной модели было характерно повышение относительного содержания МСГ в эритроцитах в течение 1-х сут и на 7-е сут наблюдения. Наибольшие изменения изучаемого параметра отмечались в период наибольшего проявления анемии - через 1,5 ч от начала эксперимента - в среднем на 33% (0,633±0,019 у. е. при 0,944±0,017 у. е. в контрольной группе, р<0,05). Введение ФГ также сопровождалось повышением доли мембран-ассоциированной фракции гемоглобина в течение первых 5-ти сут наблюдения с наибольшими изменениями через 1-3 сут после введения ксенобиотика также в период наиболее выраженной анемии - в среднем на 24% выше соответствующих значений в контроле (р<0,05).

Полученные результаты свидетельствуют о повышении уровня МСГ после воздействия различных токсикантов. Известно, что с повышением степени ненасыщенности фосфолипидов мембраны в условиях активации ПОЛ, что наблюдается при отравлениях НН и ФГ, увеличивается степень погружения в бислой триптофановых остатков глобина [3]. Сравнивая степень выраженности количественных изменений МСГ в эритроцитах при анемиях, вызванных различными соединениями, необходимо отметить, что при воздействии НН эти изменения в острый период были более выражены по сравнению со второй опытной группой. Анализ этих изменений в динамике дает право говорить об их обратимости, так как изучаемые параметры обладали выраженной лабильностью, в то время как после воздействия ФГ изменения уровня МСГ были относительно стабильны при тех же условиях. В этом, по нашему мнению, большую роль играет проявление более выраженных прооксидантных свойств ФГ, по сравнению с НН.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют в пользу нарушения эластичности мембраны эритроцитов и их деформабельности в целом. Необратимость этих процессов, связанных со степенью встраивания гемоглобина в липидный бислой, может выступать одним из основополагающих фактов повышенного разрушения эритроцитов.