1ГБОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития России (г. Пермь)

2Пермское НПО «Биомед», филиал ФГУП НПО «Микроген» (г. Пермь)

 

     В последнее десятилетие исследование различных факторов врождённого иммунитета, таких, как пептиды и белки животного происхождения, обладающих антибактериальным действием приобретает все большую актуальность в связи с перспективами использования их в качестве современных противомикробных и иммуномодулирующих средств [2, 3]. Одним из них является человеческий лейкоцитарный интерферон, обладающий иммуномодулирующими свойствами. Пермским НПО «Биомед» в процессе интерфероногенеза в качестве отдельной субстанции был выделен комплекс низкомолекулярных (1,07-1,67 кДа) пептидов [1].

     Цель данной работы – морфометрическая оценка микроструктуры и изучение динамики изменений клеточного состава тимуса, брыжеечных лимфатических узлов у лабораторных животных под влиянием различных доз пептидного комплекса (ПК), полученного в процессе интерфероногенеза. 

     Материалы и методы. В эксперименте использовали три группы белых беспородных крыс с массой 150-250 г. Препарат вводили в виде раствора ректально ежедневно в течение одного месяца. В первой группе (контрольной) ректально вводился 0,9% раствор хлорида натрия, во второй группе раствор ПК применялся в дозе 0,5 мг/мл (эмпирически подобранная терапевтическая доза), а в третьей группе использовали раствор препарата в дозе, в 25 раз превышающей терапевтическую. У животных забирали тимус и брыжеечные лимфатические узлы, фиксировали в 10% нейтральном формалине, заливали в парафин. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, метиловым зелёным и пиронином по Браше на РНК с контрольной обработкой РНК-зой. Содержание нейтральных гликозаминогликанов и гликогена оценивали в ШИК – реакции по МакМанусу с использованием в контроле амилазы. Морфометрически определяли размеры коркового и мозгового вещества долек тимуса и различных структурно-функциональных зон лимфатических узлов, а также подсчитывали в них различные клеточные формы на 1000 клеток. Для этих целей использовали морфометрическую установку Олимпус и компьютерное программное обеспечение IMAG PRO + (free version). Статистическую обработку проводили при помощи стандартного пакета статистических программ Windows 2003 (StatSoft 6.0). Использовали параметрический метод, вычисляя среднее значение (М), ошибку среднего значения (m), среднеквадратическое отклонение (δ), достоверность t-критерия Стьюдента. Различия полученных данных считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

     Результаты. Исследования показали, что органы интактных крыс имели типичную структуру и обычный клеточный состав. Размеры коркового вещества в дольках тимуса составляли 257,8414,62 мкм, а размеры мозгового – 137,549,48 мкм. Особенностью являлось только появление в междольковой соединительной ткани и в субкапсульной зоне коркового вещества долек тимуса при окраске по Браше тучных клеток (4,720,63‰). В брыжеечных лимфатических узлах этой группы животных мозговое вещество преобладало над корковым, составляя соответственно 834,51±7,38 мкм и 582,75±12,63 мкм. Высота лимфоидных узелков достигала 214,24±4,86 мкм, ширина – 245,61±4,76 мкм. Центры размножения не определялись. Паракортикальная зона содержала лимфоциты, единичные макрофаги. Ширина мозговых синусов была равна 36,51±1,66 мкм, а мозговых тяжей – 54,13±2,45 мкм. В мозговых синусах встречались немногочисленные лимфоциты и макрофаги.

     У животных 2-й группы введение препарата существенно не влияло на морфометрические показатели и не приводило к заметному изменению клеточного состава тимуса. Размеры коркового вещества немного увеличивались при практически неизменившихся размерах мозгового – 273,6113,32 и 139,9610,85 мкм, соответственно. Например, число лимфоцитов в корковом веществе долек составляло 871,9217,51‰, а в контроле – 857,1812,76‰. Незначительно увеличивалось количество макрофагов и бластных форм. Более заметным был только рост гранулоцитов (10,350,67‰), по сравнению с контрольной группой (4,370,23‰), и тучных клеток – до 9,521,72‰. Несколько снижалось число стромальных клеточных форм.

     У крыс этой группы в брыжеечных лимфатических узлах увеличивались размеры коркового вещества и изменялся клеточный состав структурно-функциональных зон. В корковом веществе в более крупных узелках с намечающимися центрами размножения появлялись бластные формы и возрастало количество макрофагов. Высота лимфоидных узелков равнялась 237,61±8,52 мкм, ширина – 271,28±7,39 мкм. Например, число лимфоцитов в лимфоидных узелках коркового вещества составляло 863,34 ± 12,78‰, а в контроле – 836,61 ± 10,21‰. В паракортикальной зоне выявлялось большее число макрофагов (73,27±7,56‰) по сравнению с контролем (44,86±5,13‰). Синусы мозгового вещества были расширены (42,71±2,09 мкм) и содержали многочисленные лимфоциты и макрофаги. В мозговых тяжах увеличивалось количество кровеносных сосудов с высоким эндотелием, а также макрофагов (в 1,4 раза) и плазматических клеток (в 1,6 раза). Возрастало число тучных клеток – до 6,25±1,31‰. 

     В структуре изученных органов животных 3-й группы выявлены наиболее значительные изменения. В дольках тимуса размеры коркового вещества заметно увеличивались – до 356,3724,68 мкм. Клетки лимфоидного ряда располагались в нём очень плотно. Количество лимфоцитов в корковом веществе долек составляло 905,9213,41‰. Доля пиронинофильных  лимфоцитов в 3,2 раза, а бластных форм в 2,7 раза превышала контрольные показатели. В узких прослойках мозгового вещества долек число макрофагов возрастало до 87,6711,34 ‰ по сравнению с контролем (35,658,61‰). Многие макрофаги имели ШИК – положительную цитоплазму и гранулы гемосидерина. Количество тучных клеток становилось максимальным – до 17,183,62‰. Число клеток стромы было наименьшим, а часть их – с признаками гипертрофии.

     В брыжеечных лимфатических узлах крыс этой группы максимально увеличивалась площадь коркового вещества (743,52±9,63 мкм). В нём определялось наибольшее число самых крупных лимфоидных узелков (высота – 261,34±6,42 мкм, ширина – 296,58±8,37 мкм), некоторые из них имели зачатковые центры размножения. Количество лимфоцитов в лимфоидных узелках возрастало до 895,79±15,43‰. Доля пиронинофильных лимфоцитов в 2,2 раза, а бластных форм в 1,5 раза превышала контрольные показатели. В паракортикальной зоне было наибольшее число макрофагов с ШИК – положительной цитоплазмой и выявлялись плазмоциты. Широкие мозговые синусы (48,47±1,43 мкм) были густо заполнены лимфоцитами, макрофагами и ретикулярными клетками. Часть клеток стромы была с признаками гипертрофии. В мозговых тяжах максимально увеличивалось количество плазмоцитов (в 1,8 раза), макрофагов (в 1,6 раза) и пиронинофильных лимфоцитов (в 2,8 раза). Выявлялось больше бластных форм. Число тучных клеток становилось наибольшим (11,28±2,24‰). 

     Заключение. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что ректальное введение пептидного комплекса, полученного в процессе интерфероногенеза, в максимально исследуемой дозе оказывает умеренное стимулирующее влияние на процессы лимфопоэза в тимусе экспериментальных животных. Более выраженные процессы активизации лимфоидной ткани отмечены в брыжеечных лимфатических узлах при воздействии препарата уже в терапевтической дозе.

 

Литература

1. Волкова Л.В., Казьянин А.В., Косарева П.В., Пестерева С.А., Гуляева Н.И., Ожерельева Е.Е., Березина Е.А., Мелехин С.В., Аверьянова Н.И. Антибактериальное и иммуномодулирующее действие пептидного комплекса, ассоциированного с процессом интерфероногенеза, в доклинических экспериментах // Пермский медицинский журнал. – 2004. – № 4. – С. 116-123.

2. Кокряков В.Н. Биология антибиотиков животного происхождения. СПб.; Наука, 1999. – 152 с.

3. Hancock R.E. Peptide antibiotics // The lancet. – 1995. – Vol. 349. – February, 8. – P. 418-422.