|
ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»(г. Красноярск)
В основе механизма реакции гемагглютинации (РГА) лежит адсорбция вируса на поверхности эритроцитов, сопровождающаяся их склеиванием.
Реакция вирусной гемагглютинации неспецифична. Специфичность гемагглютинации устанавливается с помощью специфических сывороток. Впоследствии было показано, что агглютинацию эритроцитов вызывают очень многие вирусы.
Для объяснения механизма вирусной гемагглютинации предложен ряд гипотез, наибольшие признания получила гипотеза образования мостиков между вирусными частицами и соседними эритроцитами в результате захвата одной вирусной частицей несколько эритроцитов, что лежит в основе их агглютинации. Агглютинация эритроцитов обусловлена связыванием вируса с рецептором мукопротеиновой природы, находящимися на поверхности эритроцитов.
Адсорбированный эритроцитами вирус при помощи фермента нейроминедазы (сиалидазы) разрушает мукопротеиновые группы рецепторов и элюирует.
Однако, РГА, наибольшее значение имеет при лабораторной диагностики вирусных болезней. Реакция позволяет не только обнаружить вирус в исследуемом материале, но и определить его титр.
Целью работа явилась индикация вируса болезни Ньюкасла в зараженных куриных эмбрионах и определение его титра при помощи реакции гемагглютинации.
Постановку РГА проводили по общепринятой методике в 72-луночных полистироловых платах. В качестве разбавителя использовали стерильный физиологический раствор, работу выполняли с помощью однокапельных дозаторов на 0,2 мл.
В РГА испытывали аллантоисную жидкость полученную от куриных эмбрионов, зараженных вакцинами штаммом Ла-Сота вирусной болезни Ньюкасла (БН) второго пассажа, который относится к природно-ослабленным штаммам вируса.
Зараженные вирусом БН в аллантоисную полость КЭ культивировали при температуру 37,5 0С и влажности 60-70%. При этом ежедневно путем овоскопирования определяли их жизнеспособность по подвижности и хорошей кровенаполненности сосудов хорионалантоисной оболочки. В первые троя суток культивирования гибели КЭ не наблюдали. На 5 сутки (120 часов) культивирования погибли 2 КЭ. Затем куриные эмбрионы вскрывали в стерильных условиях в боксе, стерильными инструментами и получали аллантоисную жидкость.
Эритроциты для постановке реакции получали от петуха в возрасте 1-го года, из которых готовили 1% суспензию на физиологическом растворе.
Учет реакции проводили в крестах: (+++; ++; +; -) по степени агглютинации, начиная с контроля эритроцитов, где агглютинации не было АГ(-) , т.е. образование «кнопки». За одну гемагглютинирующую единицу (ГАЕ) вируса принимали наибольшее его разведение дающее гемагглютинацию не менее чем на ++ креста. Титр вируса выражали в ГАЕ.
Результаты исследований показали, что титр вируса в пяти КЭ с продолжительностью культивирования 72 часа составил: 1 (контроль) - ; 2 – 128 ГАЕ; 3 – 128 ГАЕ; 4 – 64 ГАЕ; 5 – 256 ГАЕ. А титр вируса в пяти КЭ с продолжительностью культивирования 120 часов, составил: 6 (контроль) - ; 7 – 256 ГАЕ; 8 – 256 ГАЕ; 9 – 256 ГАЕ; 10 – 256 ГАЕ.
Таким образом, реакция гемагглютинации пригодна только для вирусов обладающих гемагглютинирующей активностью, проста в постановке и учете и не требует стерильности, позволяет обнаружить вирус в исследуемом материале и определить его титр, но требует дополнительной идентификации вируса, например, в реакции торможения гемагглютинации с вирусоспецифической сывороткой.
|
