Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра патофизиологии

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,4 мб)

 

Одной из актуальных проблем современной медико-биологической науки является неуклонно растущая заболеваемость герпесвирусными инфекциями. Вирусами из группы герпеса инфицировано около 90% населения Земли. Герпесвирусы широко распространены в человеческой популяции и способны поражать практически все органы и системы макроорганизма, вызывая латентную, острую и хроническую форму инфекции. Неблагоприятное, а порой и фатальное влияние герпесвирусы оказывают на течение беременности и родов, вызывают множественную патологию плода и новорожденных. Помимо этого герпетическая инфекция является кофактором прогрессирования ВИЧ-инфекции и СПИДа и одной из СПИД-индикаторных инфекций [2, 5]. Спектр клинических проявлений герпетической инфекции отличается значительным патоморфозом: поражение кожи различной локализации, слизистой оболочки рта, половых органов, глаз, центральной и периферической нервной системы, а также висцеральные формы. В последние годы отмечается учащение случаев герпеса, характеризующихся длительным инкубационным периодом с последующим медленным прогредиентным течением с развитием тяжелых клинических симптомов вплоть до инвалидизации и смерти больного [5].
Формирование иммунитета при герпетической инфекции является сложным и многокомпонентным процессом, в ходе которого развивается, как модулируемое в ответ на воздействие вируса простого герпеса (ВПГ), так и генетически детерминированное нарушение межклеточной кооперации иммуноцитов. Однако, состояние клеточного иммунитета в значительной степени определяет характер течения герпетической инфекции, частоту и интенсивность рецидивов. Один из важнейших механизмов, посредством которого иммунокомпетентные клетки участвуют в защите от герпетической инфекции, связан с продукцией иммунорегуляторных цитокинов, в частности интерферона-? (IFN-?) [3]. Показано, что IFN-? обеспечивает первую линию защиты организма от вируса  и участвует в дальнейших иммунных процессах борьбы с ВПГ. IFN-? стимулирует продукцию фактора некроза опухолей-альфа моноцитами, повышает экспрессию костимуляторных молекул на моноцитах/макрофагах, активирует нейтрофилы и натуральные киллеры, стимулирует продукцию антител [1].
    В последние годы новым и перспективным направлением является поиск маркеров восприимчивости к вирусной персистенции среди аллелей генов цитокинов. Аллельный полиморфизм генов цитокинов оказывает влияние на уровень экспрессии гена и количество продукции соответствующего белка [4]. Изучение роли характера распределения аллельных вариантов промоторного региона гена IFNG, а также степени их ассоциированности с уровнем продукции соответствующих белковых продуктов в иммунопатогенезе герпеса представляется весьма актуальным, поскольку позволит объяснить причины патоморфоза клинических проявлений герпетической инфекции и может быть положено в основу разработки новых способов иммунокоррекции данной патологии.
Цель исследования: установить роль аллельного полиморфизма гена IFNG в модуляции иммунного ответа при герпетической инфекции.
Материал и методы. В программу исследования вошли 80 пациентов (32 мужчины и 48 женщин в возрасте от 18 до 50 лет) с хронической герпетической инфекцией. Группу сравнения составили 82 практически здоровых донора (с бессимптомным носительством ВПГ) с аналогичными характеристиками по полу и возрасту. Материалом исследования служила стабилизированная венозная кровь, взятая утром натощак. Концентрацию IFN-? в супернатантах оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с инструкцией, прилагаемой производителем тест-систем («Cytimmune», США). Оптическую плотность растворов регистрировали на микропланшетном фотометре «Multiskan EX» («ThermoLabSystems», Финляндия). Выделение ДНК из периферической крови проводили сорбентным методом согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфного участка +874 A/T гена IFNG осуществляли с использованием  аллель-специфической амплификации специфических участков генома согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия), с применением специфических праймеров. Продукты амплификации разделяли в 2% агарозном геле. Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по U-критерию Манна-Уитни. Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с герпетической инфекцией сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах больных и здоровых индивидов, используя критерий ?2 с поправкой Йетса на непрерывность. При численностях генотипов менее пяти использовали точный тест Фишера. Об ассоциации разных генотипов с заболеванием судили по величине отношения шансов (odds ratio (OR)) с расчетом для него 95% доверительного интервала.
По мнению современных исследователей, течение герпеса сопровождает дисбаланс продукции иммунорегуляторных цитокинов. В ходе проведенного нами исследования было установлено, что у пациентов с хронической герпетической инфекцией было выявлено снижение базального синтеза IFN-? (р1<0,001) относительно соответствующих показателей  у здоровых доноров. Проведенное нами иммуногенетическое исследование показало, что среди здоровых доноров чаще встречался  генотип АА (57%) полиморфизма +874 A/T  промоторного участка гена IFNG. При этом у пациентов с хронической герпетической инфекцией преобладающим генотипом оказался вариант ТТ (62%) полиморфного участка +874 A/T  промотора гена IFNG. Следует также отметить, что частота генотипа ТТ оказалась достоверно выше (?2=2,31; р<0,05), чем у здоровых индивидов. Степень риска прогрессирования, рецидивирующего течения и неблагоприятного исхода инфекции была положительно ассоциирована с гомозиготным генотипом ТТ промоторного региона +874 A/T гена IFNG (OR=2,009). Аллель А и гомозиготный генотип АА полиморфизма +874 A/T гена IFNG обусловливали протективный эффект в отношении подверженности герпетической инфекции. Поскольку замена нуклеотида локализована в промоторной области гена IFNG мы предположили, что ее фенотипический эффект может заключаться в изменении экспрессии гена и, следовательно, уровня его белкового продукта. Результаты проведенного нами исследования показали, что максимальный уровень продукции IFN-? ассоциирован с гомозиготным по аллелю А генотипом полиморфизма +874A/T гена IFNG. У носителей гомозиготного генотипа ТТ был обнаружен наиболее низкий уровень продукции IFN-?.
    Таким образом, иммуногенетическим фактором, обладающим протективным эффектом в отношении подверженности герпетической инфекции, является гомозиготный генотип АА полиморфизма +874 A/T  гена IFNG. Степень риска прогрессирования, рецидивирующего течения и неблагоприятного исхода инфекции положительно ассоциирована с гомозиготным ТТ генотипом промоторного региона  +874 A/T гена IFNG. Генотип ТТ промоторного региона +874A/T гена IFNG чаще выявляется среди индивидов с низким уровнем продукции соответствующего цитокина.

Список литературы:
1.    Железникова, Г.Ф. Роль гамма-интерферона в иммунопатогенезе инфекций (обзор литературы) / Г.Ф. Железникова // Клиническая лабораторная диагностика. – 2008. – № 4. – C. 3–8.
2.    Исаков, В.А. Герпесвирусные инфекции человека: руководство для врачей / В.А. Исаков, Е.И. Архипова, Д.В. Исаков. – Н. Новгород; СПб., 2006. – 303 с.
3.    Иммунологические аспекты патогенеза рецидивирующего генитального герпеса / Ю.К. Скрипкин [и др.] // Герпес. – 2008. – № 1. – С. 4–6.
4.    Карпова, А.В. Сочетанный анализ аллельного полиморфизма генов цитокинов TNF-a, IL-4, IL-5, HLA-DRB-1, -DQA 1,-DQB1 при различных вариантах клинического течения атопического дерматита : автореф. дис. … канд. мед. наук. – Новосибирск, 2009. – 21 с.
5.    Марданлы, С.Г. Герпетическая инфекция (простой герпес) / С.Г. Марданлы, Г.И. Кирпичникова, В.А. Неверов. – М., 2007. – С.5-12.