Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра патофизиологии
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (1,4 мб)
Согласно эпидемиологическим исследованиям треть населения нашей планеты инфицированы Mycobacterium tuberculosis. Начало третьего тысячелетия характеризуется ежегодным увеличением заболеваемости туберкулезом, ухудшением ее структуры, более частым выявлением процессов с осложненным течением [2].
Функционирование цитокиновой сети при туберкулезе зависит от многих причин, в число которых входят индивидуальные различия в продукции иммунорегуляторных молекул, обусловленные рядом генетических особенностей [3]. Роль интерферона гамма (IFN-?) в иммунном ответе против Mycobacterium tuberculosis обусловлена его активирующим влиянием на фагоцитарную активность макрофагов и на цитотоксичность Т-лимфоцитов[4]. Помимо этого IFN-g участвует в генезе индуцированной туберкулезным антигеном в ткани легкого гранулемы посредством экспрессии адгезивных молекул и хемокинов, необходимых для рекрутирования моноцитов/макрофагов в очаг воспаления [1]. Аллельный полиморфизм +874A/T гена IFNG играет роль иммуногенетического маркера туберкулезной инфекции. Также данный полиморфизм связан с восприимчивостью к гепатиту В, а также к атипичной пневмонии с тяжелым острым респираторным синдромом [5].
В связи с этим целью настоящего исследования было изучение распространенности полиморфного участка промоторного участка +874A/T гена IFNG среди больных туберкулезом, проживающих на территории г. Томска и Томской области, и оценка степени ассоциированности генетического полиморфизма с уровнем продукции соответствующего цитокина.
В программу исследования вошли 76 больных европеоидного происхождения, проживающих на территории г. Томска и Томской области, с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких (ТЛ) в возрасте от 18 до 55 лет (45 мужчин и 31 женщина), находившихся на стационарном лечении в Томской областной клинической туберкулезной больнице. В контрольную группу были включены 60 практически здоровых доноров с аналогичными характеристиками по полу и возрасту.
Материалом исследования служила венозная кровь, взятая из локтевой вены утром натощак. Концентрацию IFN-g в супернатантах оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с прилагаемой инструкцией («ProCon», Россия). Оптическую плотность регистрировали на микропланшетном фотометре «Multiskan EX» («ThermoLabSystems», Финляндия). Выделение ДНК проводили сорбентным методом с помощью коммерческого набора «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфного участка +874A/T гена IFNG осуществляли с использованием рестрикционного анализа продуктов амплификации специфических участков генома (ПДРФ-анализ) согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия) с применением специфических праймеров. В дальнейшем продукты амплификации гена IFNG подвергали действию рестриктазы MspI. Продукты рестрикции разделяли в 3% агарозном геле.
Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по U-критерию Манна-Уитни. Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий ?2 Пирсона и точный тест Фишера. Обработку результатов генетических исследований осуществляли с помощью критерия отношения шансов (OR).
В ходе проведенного исследования было установлено, что у больных ТЛ наблюдается повышение спонтанной продукции IFN-? (98,2 пг/мл) мононуклеарами периферической крови относительно соответствующих показателей у здоровых индивидов (31,91 пг/мл). При анализе распределения частот генотипов полиморфизма +874A/T гена IFNG было выявлено, что среди больных ТЛ чаще встречаются гомозиготы по аллелю A (56%) и гетерозиготы AT (59,2%). Наиболее редким оказался генотип гомозиготный по аллелю Т (44%). В группе здоровых доноров достоверно чаще, чем среди больных, встречался гомозиготный по аллелю Т генотип. В обеих группах преобладали индивиды с гетерозиготным генотипом АТ. Была показана положительная ассоциация генотипов АА (OR=1,66) и АТ (OR=1,6), а также аллеля А (OR=1,77) с ТЛ. Было отмечено протективное действие аллеля Т (OR=0,57) и генотипа ТТ (OR=0,32).
В связи с тем, что замена нуклеотида локализована в промоторной области гена IFNG, возможно, что ее фенотипический эффект может заключаться в изменении экспрессии гена и, следовательно, уровня его белкового продукта. Результаты проведенного нами исследования показали, что максимальный уровень продукции IFN-? ассоциирован с гомозиготным по аллелю А генотипом полиморфизма +874A/T гена IFNG (152,4 пг/мл). У носителей гомозиготного генотипа ТТ был обнаружен наиболее низкий уровень продукции IFN-? (58,34пг/мл).
Таким образом, туберкулез легких сопровождается повышением секреции IFN-?. Иммуногенетическим фактором, обладающим протективным эффектом в отношении подверженности туберкулезу является аллель Т полиморфизма +874A/T гена IFNG. Степень риска развития туберкулезной инфекции ассоциирована с аллелем А полиморфного участка +874A/T гена IFNG. При этом генотип АА промоторного региона +874A/T гена IFNG чаще выявляется среди индивидов с высоким уровнем продукции соответствующего цитокина.
Список литературы:
1. Воронкова, О. В. Иммунопатология туберкулеза легких / О. В. Воронкова, О. И. Уразова, В. В. Новицкий, А. К. Стрелис //Томск: Изд-во Том. ун-та. – 2007. – С.194.
2. Новицкий, В. В. Цитокинпродуцирующая активность мононуклеарных лейкоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких до лечения и на фоне химиотерапии / В. В. Новицкий, В. А. Синицына, О. В. Воронкова и др. // Проблемы туберкулеза и болезней лёгких. – 2005. – № 6. – С. 39-42.
3. Перельман, М. И. Туберкулёз / М. И. Перельман, В. А. Корякин, Н. М. Протопопова // М.: Медицина. – 1990. – С.304.
4. Mitchell, S. A. Association of the tumour necrosis factor-? – 308 but not the interleukin 10 – 627 promoter polymorphism with genetic susceptibility to primary sclerosing cholangitis / S. A. Mitchell, J. Grove, A. Scurland et al. // J. Gut. – 2001. – Vol. 49. – P. 288-294.
5. Pereira, C. B. Interferon-?-Receptor deficiency in an infant with fatal bacille Calmette-Guerin infection / C. B. Pereira, M. Palaci, O. H. Leite et. al. // Microb. Infect. – 2004. – Vol. 6. – P. 25-33.
