|
Нижегородская государственная медицинская академия (г. Нижний. Новгород)
Центральная научно-исследовательская лаборатория НГМА (г. Нижний. Новгород) Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии» (2004 год, выпуск 1), под редакцией проф., д.м.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника
Аннотация
Изучено функциональное состояния нейтрофилов крови и уровень перикисного окисления липидов плазмы у крыс в норме и с оральным кандидозом после воздействия некогерентным импульсным излучением видимого диапазона света (НКИ). Показано, что НКИ стабилизирует состояние нейтрофилов и увеличивает функциональный резерв фагоцитов у инфицированных крыс и не изменяет реактивные параметры клеток здоровых животных. .
Введение
Кандидоз слизистых оболочек является одной из самых распространенных оппортунистических инфекций [1]. В предварительных исследованиях нами был обнаружен кандидацидный эффект некогерентного импульсного излучения видимого диапазона света (НКИ) в системах in vitro (данные не показаны). В то же время, влияние высокоэнергетических импульсных воздействий электромагнитной природы на кандиды, адгезированные на слизистой оболочке в системе in vivo, а также на макроорганизм, изучено не достаточно.
В настоящее время нейтрофилы рассматриваются не только как инструмент противоинфекционного иммунитета, но и как универсальный эффектор и индикатор гомеостаза [2]. Кроме того, полагают, что фагоциты и, в частности, нейтрофилы,
играют ведущую роль в антикандидозной защите организма [3]. Другим интегральным критерием гомеостаза и его нарушений может служить уровень перекисного окисления липидов (ПОЛ), отражающий активность свободноради-кальных процессов в тканях. [4].
В связи с этим, целью настоящей работы было определение функционально-го состояния нейтрофилов крови и ПОЛ у животных с экспериментальным оральным кандидозом после воздействия некогерентного импульсного излучения видимого диапазона света.
Материалы и методы
В качестве воздействующего фактора применялось некогерентное импульсное излучение (НКИ). Генерация факторов проводилась в однократном режиме (каждые 5 секунд). Спектральный состав некогерентного светового излучения соответствовал видимой части диапазона длин волн (200-1000 нм).
В эксперименте использовали белых беспородных крыс самцов массой 200 - 250 грамм. Животных заражали перорально [5] суспензией C.albicans штамм 601 (0,1 мл, 5.107 кл/мл, коллекция кафедры микробиологии и имунологии НГМА, Н.Новгород). Через 1 час после микробной инокуляции, слизистую ротовой полости крыс подвергали воздействию импульсными факторами в однократном режиме в дозах: 100 импульсов (1 группа ) или 300 импульсов (2 группа). Через 24 часа живот-ных 1-й и 2-й групп вновь подвергали воздействию НКИ: 300 и 600 импульсов соот-ветственно. Контролем служили интактные крысы; животные, подвергавшиеся одно-кратному облучению в режиме 100 или 300 имп, а также крысы с оральным канди-дозом, не повергавшиеся облучению. Каждая группа включала 7 животных. Через 6 суток после заражения /облучения животных декапитировали под эфирным нарко-зом, кровь отбирали в гепаринизированную посуду.
О реактивных изменениях нейтрофилов судили по показателям метаболичес-кой перестройки клеток, фиксируемой методом люминолзависимой хемилю-минесценции (ХЛ) [6]. ХЛ нейтрофилов крови измеряли в имп/мин на жидкостно-стинцилляционном счетчике "Бета-1" (КПО "Медаппаратура", Украина). Для изу-чения спонтанной ХЛ (сХЛ) в силиконированных флаконах смешивали 1 мл крови (разведение 1: 100 в растворе Хенкса без фенолового красного) и 0,1 мл 10 -2 М раствора люминола (Chemapol, Чехия). Для измерения индуцированной (иХЛ) в систему вносили 0,1 мл латекса (1,77 мкм; 5.10 8 частиц/мл; НПО "Каучук", С-Пб). Измерения проводили при 37 0С с интервалом 5 мин (в течение 6 сек). В контроле стимулятор заменяли раствором Хенкса. Каждый опыт ставили в трех повторах, учитывали средний результат (имп/мин) на пике ХЛ.
Уровень процессов ПОЛ сыворотки крови оценивали методом хемилюми-несценции [7]. Интенсивность ПОЛ определяли по значению светосуммы (S) ХЛ за 60 с. Уровень ХЛ выражали в импульсах. Экспериментальные данные обрабатывали с помощью статистической компьютерной программы «Stadia» (версия 4.51.)
Результаты и обсуждение
Существенное повышение сХЛ нейтрофилов у крыс с оральным кандидозом, по сравнению с интактными, свидетельствовало о наличие инфекционного процесса у животных (табл.1.). В то же время, показатели сХЛ у зараженных животных,
облученных в режимах :100+300 и 300+600 импульсов были существенно ниже, чем в аналогичной группе, не подвергавшейся воздействию НКИ. Поскольку сХЛ отражает реактивные сдвиги нейтрофилов непосредственно в организме, то снижение сХЛ у животных с кандидозом, после воздействия НКИ, указывало на положительную тенденцию к стабилизации состояния фагоцитов.
Таблица 1. Изменение реактивности нейтрофилов крови и ПОЛ плазмы крыс после воздействия НКИ видимого диапозона (M ± m) | | сХЛ (10 4 мп/мин) | иХЛ (10 4 имп/мин) | сХЛ/ иХЛ (ИР) (усл.ед.) | ПОЛ плазмы S (имп/мин) | | Контрольные группы | | интактная | 25,41 ± 11,75 | 120,71 ± 55,52 | 4,82 ± 1,25 | 79,40 ± 12,49 | | 100 имп | 39,1 ± 16,2 | 108,0 ± 28,8 | 3,35 ± 1,31 | 86,47 ± 15,94 | | 300 имп | 29,4 ± 7 ,8 | 140,4 ± 59,4 | 4,65 ± 0,98 | 95,28 ± 6,03 | | Животные с оральным кандидозом | | без воздействия | 70,96± 10,50* | 169,85 ± 41,78 | 2,38 ± 0,38 * | 95,29 ± 11,58 | | 100 + 300 имп | 49,64± 8,5 ** | 128,06 ± 34,35 | 2,52 ± 0,36 | 82,07 ± 11,57 | | 300 + 600 имп | 31,78± 4,67** | 149,97 ± 48,97 | 4,61 ± 1,05 ** | 78,085 ± 14,6 | *- достоверность относительно контрольной интактной группы, p< 0,05 ** - достоверность относительно животных с оральным кандидозом без воздействия НКИ , p< 0,05
Показатели иХЛ практически не отличались друг от друга во всех группах животных, поэтому для характеристики функционального резерва фагоцитов был введен индекс реактивности (ИР): соотношение между показателями иХЛ и сХЛ.
ИР нейтрофилов значительно снижался на фоне экспериментального кандидоза (табл.1) , а функциональный резерв клеток восстанавливался до контрольных показателей (нормы) только после воздействия НКИ в режиме 300+600 импульсов.
Уровень ПОЛ плазмы несущественно повышался на фоне экспериментального кандидоза, и наблюдалась незначительная тенденция к снижению показателей до исходного уровня (контроля) на фоне действия НКИ.
Результаты показали, что различные режимы НКИ (100 или 300 импульсов)
не оказывали существенного влияния на состояние нейтрофилов, индекс реактив-ности фагоцитов и ПОЛ плазмы крови у здоровых (незараженных ) животных. Литература.
1. А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. М: Триада-Х, 2000. - 472 с.
2. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань: Магариф, 1993.-192 с.
3. Challacombe S. J. Immunological aspects of oral candidiasis // Oral. Surg. Oral. Med. Oral. Pathol.-1994.-Vol.78.-N.2.-P.202-210.
4. Барабой В.А., Брехман И.И. Чеботарев В.А и др. Перекисное окисление и стресс.- С.-Пб.: Наука,1992ю - 148 с.
5. Samaranayake Y.H., Samaranayake L.P. Experimental Oral Candidiasis in Animal Models / Clinical Microbiology Reviews. - 2001.- Vol. 14.- No. 2.- p. 398-429.
6. Tono-Oka T., Ueno N., Matsumoto T. Chemiluminescens of whole blood. A simple and rapid method for the estimation of phagocytic function of granulocytic and opsonic activity in whole blood // Clin. Immunol. Immunopatol.1983.- Vol.26.- N.1. - P.66-75
7. Кузмина Е.И., Нелюбин А.С., Щенников М.К. Применение индуцированной хемилюминесценции для оценки свободно-радикальных реакций в биологических субстратах. Межвузовский сборник биохимии и биофизики микроорганизмов. Горький.-1983.-с 179-183.
|
