Сибирский государственный медицинский университет,  г. Томск
Кафеда медицинской генетики

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 68-й научной итоговой студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 20-22 апреля, 2009 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,5 мб)

 

Современные представления о генетической предрасположенности многофакторных заболеваний предполагают, что для развития клинической формы заболевания требуется наличие в генотипе индивида определенных аллельных вариантов генов, формирующих неблагоприятный наследственный фон, которые реализуются патологическим фенотипом при взаимодействии с факторами среды.[1]
Известно, при бронхиальной астме (БА) наблюдается сдвиг в сторону Th2-иммунного ответа. Нарушение баланса Th1/Th2 является решающим в поляризации иммунного ответа. В свою очередь, генетические полиморфизмы могут оказывать влияния на уровень экспрессии генов, приводить к изменению функциональной активности его продукта. Таким образом, полиморфизмы генов иммунного ответа, как например, IFN-γ, его рецептора, также транскрипционные факторы могут вносить существенный вклад в развитие Th2-ассоциированных заболеваний.[2, 3, 4].
 В связи с этим цель настоящего исследования - анализ  связи однонуклотидных замен генов IFN-γ, STAT4, TBX21 и делеции гена INFGR2 с БА и ее клиническими проявлениями. Была сформирована панель однонуклеотидных полиморфизмов генов: IFN-γ (rs 2069705, С/T 3’ UTR), STAT4 (rs 7572482, A/G intron 1), TBX21 (rs 11652969, A/G intron 1), IFNGR2 (rs 17880053, -/G 5’ UTR).
 Включение пациентов проведено методом сплошного одномоментного исследования в процессе диспансерного осмотра приписного населения общих врачебных практик медицинского объединения «Центр семейной медицины» в период 2006-2008. Были сформированы группы больных БА (65 женщин, 23 мужчины) и контрольная группа (96 женщин, 22 мужчин).
ДНК выделяли из мононуклеаров венозной крови методом фенол-хлороформной экстракции. Амплификацию фрагментов ДНК проводили с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Использовалась ПЦР-смесь: 2,5 пмоль специфических праймеров, 2 ммоль каждого dNTP, 1,2 мл 10х реакционного буфера, 1,5 ммоль MgCl2, 0,5 Ед Taq ДНК-полимеразы (SibEnzime, Россия), 100-200 нг геномной ДНК. Для определения полиморфных вариантов проводили гидролиз амплифицированных фрагментов генов IFN-γ,  STAT4,  IFNGR2, TBX21 рестриктазами: Нpa I, Fae I,  Msp 20I,  BssT1I соответственно. Для определения полиморфных вариантов проводили гидролиз амплифицированных фрагментов генов IFN-γ,  STAT4,  IFNGR2, TBX21 рестриктазами: Нpa I, Fae I,  Msp 20I,  BssT1I соответственно. Продукты рестрикции разделяли в 3% агарозном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете. Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием прграмм SPSS for Windows.
Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Шапиро-Уилка. Для сравнения частот генотипов между группами использовали точный тест Фишера. Обработку результатов генетических исследований осуществляли с помощью критерия Крускола-Уолиса, и дисперсионного анализа. Проведен анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов с бронхиальной астмой, наличием специфической и поливалентной сенсибилизации по данным кожных аллергопроб, уровнем общего IgE, а также с параметрами легочной  функции (PEV%, FEV1%, FVC%).
Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам соответствовало равновесию Харди-Вайнберга и представлено в табл1. Согласно полученным данным, для полиморфных вариантов генов IFN-γ,  STAT4,  TBX21,  IFNGR2  распределение генотипов и аллелей не различались между больными БА и здоровыми индивидами (Табл.). Данные полиморфные маркеры не ассоциированы со специфической и поливалентной сенсибилизацией и уровнем IgE (р>0,05).
По результатам статистической обработки была получена ассоциация делеции IFNGR2 (rs 17880053) с параметрами легочной функции (PEV%, FEV1%, FVC%) (р<0,05).

                                                                                                                                       Таблица

Частота генотипов и аллелей полиморизмов генов IFN-γ, STAT4, TBX21, INFGR2 в исследуемых группах

ген	полиморфизм	группа	генотип			p	аллель		p
IFN-γ	С/T	здоровые	С/С	T/C	T/T	0,249	C	T	0,617
			23,85	44,95	31,18		46,33	53,67
		больные	21,18	56,47	22,35		49,41	50,59
STAT4	A/G	здоровые	A/A	A/G	G/G	0,574	A	G	0,446
			88,54	10,42	1,04		91,49	8,51
		больные	82,14	17,86	0,0		91,07	8,93
TBX21	A/G	здоровые	А/A	A/G	G/G	0,918	A	G	0,997
			12,39	45,13	42,48		34,96	65,04
		больные	10,47	47,67	41,86		34,30	65,70
IFNGR2	-/G	здоровые	-/-	-/G	G/G	0,692	del	G	0,745
			77,48	20,72	1,80		87,84	12,16
		больные	78,82	21,18	0,0		89,41	10,59

   

       Гомозиготы по наличию делеции (-/-) имеют более низкие показатели функции внешнего дыхания, что является клинически неблагоприятным признаком. К настоящему времени данный полиморфизм является малоизученным, не выяснена его функциональная значимость. Но можно предположить, что наличие этой делеции может приводить к изменению сайтов связывания ряда транскрипционных факторов, которые участвуют в различных молекулярно-генетических взаимодействиях. Дальнейшие генетические исследования и  выявление функциональной значимости полиморфных вариантов в промоторной области генов помогут определить их роль в патогенезе  БА.
 
Список литературы:
1.    Роль полиморфизма генов цитокинов и их рецепторов в развитии атопической бронхиальной астмы / В. А. Казначеев, Ю. В. Гервазиев// Астма. – 2004. – Т. 5, №  1. – С. 73-84.
2.    Современные представления о JAK-STAT системе как новой сигнальной системе и ее нарушениях при иммунной патологии / В. Н. Минеев, Л. Н. Сорокина// Аллергология. –      2005. -  №4. – С. 38-44.     
3.    Генетические основы предрасположенности к некоторым частым мультифакториальным заболеваниям / В. С. Баранов// Медицинская генетика. – 2004. - № 3. – С. 102-106.
4.    Citokines, allergy, and asthma / P. L. Nqol, D. R. Gold, A. O. Tzianabos, S. T. Weis, J. S. Celedon// Curr. Opin. Allergy. Clin. Immunol. – 2005. - № 2. – P. 161.