Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
НИИ психического здоровья ТНЦ СО РАМН, г. Томск

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,4 мб)

 

Актуальность: В клинике психических расстройств шизофрения является одной из актуальных проблем, вследствие преобладания по распространенности, тяжести социальных последствий и высоких показателей инвалидизации. Вопросы этиологии и патогенеза шизофрении сложны и до конца не известны. Существует множество теорий возникновения этой болезни. Одна из них, аутоинтоксикационная, позволяет сделать вывод о том, что в основе развития шизофрении могут лежать нарушение белкового обмена и накопление в организме больных разнообразных белковых продуктов. Тем не менее, до сих пор не удалось обнаружить признаков наличия биохимических сдвигов, белка – маркера, отличающегося особой специфичностью, свойственного только больным шизофренией. Исходя из этого, на сегодняшний день актуален поиск специфических маркеров в протеоме, строго  характерных только для шизофрении.
Материал и методы: Обследовано 9 человек, страдающих шизофренией, в возрасте от 26 до 53 лет. Все больные находятся на лечении в отделении эндогенных расстройств НИИ психического здоровья СО РАМН. Сравнение проводили с группой практически здоровых людей, соответствующих по полу  и возрасту.
Исследуемые образцы после 5-кратного разведения буфером PBS, центрифугирования и фильтрования через стандартный фильтр, подвергались аффинной хроматографии на хроматографе фирмы Agilent Technologies c целью удаления 6 мажорных белков: альбумин, иммуноглобулин G, иммуноглобулин А, антитрипсин, трансферин и гаптоглобин. Фракции белков, не связавшиеся с аффинной сорбентом, концентрировали с помощью центрифужных ультрафильтров  Амикон-ультра с MWCO 5 кDа и анализировали гель-электрофорезом в 10 %  полиакриламидном геле в присутствии SDS, с окраской Coomassie Brilliant Blue. Затем проводили трипсинолиз белка в геле. Белковые пятна в геле помещали в пробирки, в которые добавляли 30 мкл смеси, содержащей 50% ацетонитрила и 5% муравьиной кислоты. Полученную смесь интенсивно перемешивали на vortex в течение 5 мин. Супернатант использовали в качестве исследуемого образца для проведения масс-спектрометрического анализа. Подготовленную таким образом белковые экстракты вносили в лунки стального планшета для MALDI-TOFмасс-спектрометрии в объеме 1 мкл, после чего на образцы наслаивали по 1 мкл насыщенного раствора матрицы-а-СНСН в растворе, содержащем 50% ацетонитрила и 0,1% трифторуксусной кислоты. В качестве контрольного образца, а также внешнего калибратора использовался стандартный набор белков фирмы «Bruker Daltonics» (Германия). Масс-спектрометрический анализ проводили с использованием MALDI-TOF масс-спектрометра Autoflex («Bruker Daltonics»,Германия). Для получения каждого масс-спектра использовали от 1400 до 2000 импульсов лазера с мощностью излучения, установленной на уровне минимального порогового значения, достаточного для десорбции - ионизации образца. Параметры масс-спектрометра оптимизировали для диапазона m/z от 5000 до 50 000 Da. Для каждого образца записывали спектр, полученный в результате суммирования 10 одиночных спектров (1400-2000 импульсов лазера). Для записи использовали программное обеспечение FlexControl 2.4 (Build 38), а для обработки и анализа масс- спектров FlexAnalysis 2.4 (Build 11) фирмы «Bruker Daltonics» (Германия). Идентификацию белков проводили путем поиска совпадения значений экспериментальных масс с массами белков, аннотипированных в соответствующих базах данных с использованием ресурсов Matrix Science
Результаты и их обсуждение: При анализе полученных данных выявлены значимые различия масс- спектров, количество детектируемых в образцах в контрольной группе пиков значительно уступало количеству пиков, наблюдаемых в масс-спектрах образцов исследуемой группе. По результатам сравнения масс- спектрометрических профилей получились отличия в белковом спектре плазмы крови больного шизофренией, в сравнении со здоровым донором.

мол. масса	международное название белка
11168	Apolipoprotein A-II precursor
21981	Phosphomevalonate kinase
30631	Complement factor H-related protein 2 precursor
36369	Fibrinogen-like protein 1 precursor
40051	Monocyte differentiation antigen CD14 precursor
41710	Actin, cytoplasmic 1 (Beta-actin)
41766	Actin, cytoplasmic 2 (Gamma-actin)
41850	Actin, gamma-enteric smooth muscle (Smooth muscle gamma actin)
51479	Fibrinogen gamma chain precursor
52253	Carboxypeptidase N catalytic chain precursor
57487	GH3 domain-containing protein precursor
55892	Syntaxin-binding protein 3
73677	Nucleolar phosphoprotein p130)
75883	Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1
82173	Serine/threonine-protein kinase DCAMKL1

Дальнейшее детальное изучение белкового спектра сыворотки крови при шизофрении может  дать много информации, полезной для более успешного лечения и профилактики этого  тяжелого психического заболевания.
Работа была проведена на базе Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН г. Новосибирск, в лаборатории исследования модификации биополимеров. Руководитель лаборатории – д. хим. наук, профессор Фёдорова О.С.