Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

 

Участие многоядерных макрофагов в развитии хронического воспаления, на котором основан патогенез ряда заболеваний, определяет актуальность изучения этих клеток [2]. Достаточно важными являются и теоретические вопросы образования и функционирования многоядерных макрофагов, представляющие собой частные аспекты проблемы полинуклеаров [2], при рассмотрении которых целесообразно ориентироваться на результаты исследований, базирующихся на достоверной оценке морфологических характеристик и показателей функциональной активности клеток. Кроме того, важно учитывать роль многоядерных форм в реализации патологических процессов, что связано с необходимостью изучения клеточных реакций с участием полинуклеаров [2]. При проведении таких исследований часто используют первичные культуры перитонеальных клеток, что объясняется адекватностью данного подхода и его технологической доступностью [2]. 

Рассмотрим ряд основных методов исследования, обеспечивающих получение информации необходимой для решения указанных задач. Не вызывает сомнения тот факт, что для оценки степени интенсивности реакций формирования многоядерных производных следует определять частоту встречаемости клеток с признаками синтеза факторов, контролирующих процесс клеточного слияния. Существенную роль играет определение продукции IL-1 [14], IL-4 [4; 11], GM-CSF [12], TNF-a [14] и IFN-g [13]. Также проводят учет количества макрофагов с цитоморфологическими признаками амитотического деления ядер, имеющего значение для образования полинуклеаров, и оценивают частоту встречаемости многоядерных макрофагов с характерным расположением ядер, что важно для идентификации морфологических типов этих производных [2]. 

Известно, что секреторная активность многоядерных макрофагов является одной из основных функций этих клеток [2]. Поэтому необходимо оценивать интенсивность продукции ряда медиаторов. В частности, цитокинов, контролирующих клеточную фузию [12; 14], и таких факторов, как IL-1 [9; 10] и FGF [3; 8], детерминирующих профиброзную активность клеток. 

Важным показателем является и степень напряженности синтеза нуклеиновых кислот. Оценку синтеза ДНК проводят путем выявления белка пролиферации Ki-67 [7] с последующим подсчетом численности клеток со специфически окрашенным материалом, а также вследствие определения объема последнего методами компьютерного морфометрического анализа. Синтез РНК оценивают с помощью цитохимической окраски пиронином G [6] с последующим подсчетом количества клеток со специфически окрашенным материалом, и путем определения его объема в ходе компьютерного морфометрического анализа. 

Отметим и другие виды клеточной активности, среди которых следует указать фагоцитоз, способность к интегративным взаимодействиям и реакции перестройки элементов цитоскелета. Заметим, что оценка фагоцитарной функции макрофагов проводится на основании определения таких показателей, как фагоцитарный индекс и фагоцитарное число [1]. Определение интегративной активности макрофагов реализуется путем оценки частоты встречаемости клеток, установивших межклеточные контакты [2]. Для косвенной оценки активности перестроек элементов цитоскелета подсчитывается численность макрофагов с признаками распластывания краевой зоны цитоплазмы и учитывается значение ядерно-цитоплазматического индекса [2]. 

Вместе с реакциями образования и функционирования многоядерных макрофагов заслуживают внимания и процессы элиминации этих клеток. Подчеркнем, что оценка интенсивности апоптоза проводится путем определения относительной численности макрофагов с цитоморфологическими признаками этого процесса. Учитывая роль проапоптотических (TNF-a) и антиапоптотических (IL-4) медиаторов в реализации апоптоза у макрофагов [5] необходимо осуществлять подсчет клеток, продуцирующих эти факторы. 

Таким образом, применение методов цитологического анализа, цитохимических, иммуноцитохимических и функциональных тестов, а также культуральных технологий способствует получению достоверной информации о структурных и функциональных характеристиках многоядерных макрофагов, позволяя уточнить многие аспекты формирования, функционирования и элиминации полинуклеарных производных. 

Список литературы: 

1. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 1992. - 264 с. 

2. Ильин Д.А. Многоядерные макрофаги. - Новосибирск: Наука, 2011. - 56 с. 

3. Adamson I.Y., Letourneau H.L., Bowden D.H. Comparison of alveolar and interstitial macrophages in fibroblast stimulation after silica and long or short asbestos // Lab. Invest. - 1991. - V. 64. - № 3. - P. 339-344. 

4. Anderson J.M. Multinucleated giant cells // Curr. Opin. Hematol. - 2000. - V. 7. - № 1. - Р. 40-47. 

5. Brodbeck W.G., Shive M.S., Colton E., Ziats N.P., Anderson J.M. Interleukin-4 inhibits tumor necrosis factor-alpha-induced and spontaneous apoptosis of biomaterial-adherent macrophages // J. Lab. Clin. Med. - 2002. - V. 139. - № 2. - Р. 90-100. 

6. Darzynkiewicz Z., Kapuscinski J., Traganos F., Crissman H.A. Application of pyronin Y(G) in cytochemistry of nucleic acids // Cytometry. - 1987. - V. 8. - № 2. - P. 138-145. 

7. Furrer K., Tian Y., Pfammatter T., Jochum W., El-Badry A.M., Graf R., Clavien P.A. Selective portal vein embolization and ligation trigger different regenerative responses in the rat liver // Hepatology. - 2008. - V. 47. - № 5. - P. 1615-1623. 

8. Gu L., Xu W.B., Liu H.R., Guo Z.J., Xu X.X., Zhu Y.J. Different cytokine profiles in usual interstitial pneumonia and nonspecific interstitial pneumonia // Zhonghua Jie. He. He. Hu. Xi. Za. Zhi. - 2003. - V. 26. - № 6. - P. 350-353. 

9. Gunella G., Bardelli C., Amoruso A., Viano I., Balbo P., Brunelleschi S. Macrophage-stimulating protein differently affects human alveolar macrophages from smoker and non-smoker patients: evaluation of respiratory burst, cytokine release and NF-kappaB pathway // Br. J. Pharmacol. - 2006. - V. 148. - № 4. - P. 478-489. 

10. Levy H., Murphy A., Zou F., Gerard C., Klanderman B., Schuemann B., Lazarus R., Garca K.C., Celedіn J.C., Drumm M., Dahmer M., Quasney M., Schneck K., Reske M., Knowles M.R., Pier G.B., Lange C., Weiss S.T. IL1B polymorphisms modulate cystic fibrosis lung disease // Pediatr. Pulmonol. - 2009. - V. 44. - № 6. - P. 580-593. 

11. McInnes A., Rennick D.M. Interleukin 4 induces cultured monocytes / macrophages to form giant multinucleated cells // J. Exp. Med. - 1988. - V. 167. - № 2. - Р. 598-611. 

12. Mizuno K., Okamoto H., Horio T. Muramyl dipeptide and mononuclear cell supernatant induce Langhans-type cells from human monocytes // J. Leukoc. Biol. - 2001. - V. 70. - № 3. - P. 386-394. 

13. Most J., Neumaer H.P., Dierich M.P. Cytokine-induced generation of multinucleated giant cells in vitro reguires interferon-g and expression of LFA-1 // Eur. J. Immunol. - 1990. - V. 20. - № 8. - Р. 1661-1667. 

14. Pfeilschifter J., Chenu C., Bird A., Mundy G.R., Roodman G.D. Interleukin-1 and tumor necrosis factor stimulate the formation of human osteoclastlike cells in vitro // J. Bone Miner. Res. - 1989. - V. 4. - № 1. - P. 113-118. 

УДК 619:615.371