Сибирский государственный медицинский университет (г.Томск)

 

Комплекс HLA выгодно отличается от всех известных в настоящее время генетических систем,  прежде всего своим  чрезвычайным   полиморфизмом, что позволяет    значительно     индивидуализировать  показатели относительного риска к тем или иным неблагоприятным условиям и заболеваниям для небольшой группы населения и  выделить лиц,  особенно  подверженных действию определенного   фактора (Зарецкая Ю.М.,1983;  Bender K.,1984; Tiwari  J., Terasaki P., 1985; Perier P.,1990).  Кроме того, в настоящее время доказано важное значение генетической системы HLA в регуляции иммунитета. Гены HLA детерминируют  формирование    клеточной    оболочки, что  играет огромное  значение в межклеточных взаимоотношениях, в   контроле иммунного ответа и других иммунологических  феноменах (Schwartz R.H.,1988). Полагают также, что гены, детерминирующие антигены первого и второго классов, являются сами  по себе  генами  иммунного ответа.  Косвенным подтверждением этому служат установленные ассоциации антигенов системы HLA с заболеваниями,  в  патогенезе  которых ведущую роль играют иммунологические механизмы, в частности, с аутоиммунными болезнями (Зарецкая Ю.М.,  Абрамов В.Ю.,1986; Сибирякова Л.Г. с соавт;1988; Коненков В.И.,1989).

В связи с изложенным целью настоящей работы являлось изучение генотипической ситуации по HLA  комплексу антигенов среди жителей Ханты-Мансийского округа Тюменской области и роли определенных гаплотипов HLA в чувствительности к описторхозной инвазии.

При выполнении настоящей работы ставились следующие задачи:         

1. Изучить частоту различных антигенов по комплексу HLA среди здоровых доноров - аборигенов района  и мигрантов в этот район.

2. На основании полученных данных по структуре народонаселения ответить  на  вопрос - существует ли различие по системе  HLA между аборигенами и мигрантами - жителями Ханты-Мансийского округа.

3. Изучить мутагенную чувствительность к дериватам марит Opisthorchis felineus  Т-лимфоцитов крови  в  условиях  культуры,  полученную от двух групп аборигенов Ханты-Мансийского округа:  а) с редко встречаемыми антигенами HLA б) с часто встречаемыми антигенами HLA , по сравнению с мигрантами в этот район.

4. Изучить генотипическую структуру по системе антигенов HLA  у коренных долгожителей Ханты-Мансийского округа Тюменской области.           5. Изучить мутагенную чувствительность к дериватам марит Opisthorchis felineus Т-лимфоцитов крови, полученную от долгожителей Ханты-Мансийского округа      

6.Обследовать на предмет генотипической структуры по системе  HLA доноров в родословной которых имелись случай раковых заболеваний.                 

Материалом послужила кровь 566 человек, из которых  425 доноров-аборигенов Ханты-Мансийского округа,   а также контрольной группы  - 141  мигрантов,  приехавших  в этот район из Европейской части страны. Во всех случаях это были лица русской национальности, поскольку геногеография тканевых антигенов зависит от этнической принадлежности проживающих в данном регионе людей  (Зарецкая  Ю.М.,1983;   Шабалин   В.Н.,Серова    Л.Д.,1988).  

Среди 425 коренных жителей 395 были носителями описторхозной инвазии (92,9%), а у мигрантов из 141 пораженными были 107 человек (75,9%).      

         Выявление антигенов HLA на лимфоцитах основано на  использовании реакций  комплементзависимой цитотоксичности (Зарецкая Ю.М., 1983). В работе применяли панель из 116 сывороток, которая согласно 9-го Международного  совещания  по   тканевому   типированию (1984) индифицирует 16 антигенов HLA-A, 26 антигенов HLA-B  и 8 антигенов - HLA-C. Анализ данных проводили на микро-ЭВМ фирмы "Hewlett-Packard  85А" (США).  Рассчитывали частоту встречаемости антигенов, генов, фенотипов, гап-         лотипов HLA и показатели неравновесного  сцепления (Зарецкая Ю.М.,1983). Относительный риск  (RR) развитие заболевания у носителей  антигена по сравнению с индивидуумами не имеющими этого  антигена, определяли по формуле Woolf  (Зарецкая Ю.М., 1983).               

         Нами проведено типирование НLА -антигенов  1  класса  у   доноров,  не  состоящих  в   кровном родстве. В выборку включали доноров, у которых все предки не менее чем в трех поколениях были хантами и постоянно проживали в Ханты-Мансийского округа Тюменской области. Для сравнения использованы результаты исследования НLА-антигенов у  здоровых  доноров  русской  национальности,  приехавших в район, в этом поколении, а также проживших на протяжении трех поколений  в условиях севера Западной Сибири.     Установлено, что у всех этнически русских - жителей  Ханты-Мансийского округа наиболее часто встречались антигены НLА- А1 (25, 0%), А2 (30,2%), А3 (19,8%), В8 (21,4%) , В44 (22,9%), Сw4 ( 26,1% ) и редко - НLА - А30 ( 5,2%), А32 (5,2%), В41 (1,04%).  В то же время у этих доноров выявлены гены маркеры монголоидной популяции:  НLА-В48 (2,1%) , В52 (6,2%) и   В61 (3,1%).  Приведенные данные согласуются с  известным мнением, что  русские,  проживающие в Сибири имеют смешанный тип распределения генов НLА (Рочинский, Левин, 1978; Бунак с соавт. 1989).     В то же время в отличие от русских-мигрантов  у  аборигенов больных описторхозом Ханты-Мансийского округа выявлена повышенная встречаемость НLA  А1     (25,0 против 14,1 % в контроле), Аw25 (8,3 против 3,5%),   В8 (21,9 против 10,3%) ,  В17 (9,4 против 3,5 %) В48 (2,1 против 0,59%), Вw52 (6,2 против 2,3%), Сw6 (10,4 против 4,7%),  Сw5 (4,2 против 1,2 %). С другой стороны в Ханты-Мансийском округе среди аборигенов редко встречались  люди  с   антигенами HLA   А2 ,  А11 ,  Аw23,  Аw32 , В7, В13, В18, В27, В41 и В49. Среди аборигенов отсутствовали люди с антигенами  Вw54 и Вw56.     Для суждения о силе ассоциации между антигенами и болезнью был рассчитан критерий относительного риска (RR), указывающий на возможность развития болезни у носителей антигена по сравнению с лицами, не имеющими его. Полученные нами данные свидетельствуют о наличии ассоциации заболевания хроническим описторхозом с системой HLA-генов. Так, риск заболевания у людей, имеющих антиген А1, увеличивается в 2 раза,  А34 и А36 - в 1,8 раза, Аw25 - в 2,8 раза, Сw5 - в 3,1 раза, В8 - в 2,5 раза. В то же время выявлена негативная ассоциация с заболеванием описторхозом антигенов HLA-B13, B18 , что позволяет расценивать соответствующие гены, как протективный фактор. Анализ встречаемости внутрилокусных комбинаций антигенов у больных хроническим описторхозом и здоровых доноров выявил резкие различия встречаемости фенотипов А0А1, А1А34, А2А11, А1А32 и ВОВ8. Установлена положительная корреляция с хроническим описторхозом фенотипов А1А34 (R=4,8), А3А32 (R=4,6),  В0В8 (R=6,5), СwC0Cw1 (R=5,6) и отрицательная - А2А11 (R=-2,6), А0А2 (R=-3,5), В7В13 (RR=-2,5), в13В18 (R=-2,5)  и др. Исследование характера гаметных ассоциаций между антигенами показало, что статистически достоверные данные неравновесного сцепления при хроническом описторхозе у данной популяции встречаются довольно часто. Наиболее высокая степень неравновесия по сцеплению генов отмечена в отношении А28 и В37, А34 и В8.    При корреляционном анализе выявлено, что гаплотипы А1В17 и А2В7 имеют отрицательные значения гаметных ассоциаций (соответственно -3,1 и 4,2). Это указывает на то, что среди больных людей данные гаплотипы практически не встречаются.

   Сравнение характера распределения гаплотипов у людей с хроническим описторхозом и здоровых выявило увеличение частот гаплотипов А0В0, А1В8, А2В44, А1В60 и А3В51. У лиц, имеющих данные гетерозиготные комбинации, отмечалось повышение риска развития хронического описторхоза в 3-6 раз. Устойчивость к описторхозу у носителей гаплотипов А2В13 увеличивалась в 5,1 раза,  А2В18 - в 4,5 раза.  Следует отметить накопление у больных хроническим опистлорхозом гаплотпа HLA - А1В18, ассоциированного, по мнению многих авторов, со склонностью к развитию аллергических и иммунных заболеваний.

   При  сравнени доли риска, приходящегося на каждый антиген, входящий в данный гаплотип, и риска заболевания, связанного с этими гаплотипами, отмечается усиление взаимного влияния антигенов. Так, риск возникновения описторхоза у носителей антигенов HLA - А1  и В8  составил соответственно 2,0 и 2,5, а при их сочетании увеличивался до 3,1.     Показано, что сочетания антигенов, имеющих позитивное и негативное значение для возникновения описторхоза, практически отсутствуют. В основном комбинации антигенов в группе больных  происходят таким образом, что негативное действие усиливается (например антигены А1 и А34).

   Интересно отметить, что у больных описторхозом наблюдается повышение встречаемости фено-генотипов, в которых хотя бы один антиген не был идентифицирован, т.е. находился в  "бланке" ("нуль" антиген).  Мы полагаем, что это может быть связано с тем, что снижается способность лимфоцитов больных хроническим описторхозом экспрессировать на своей поверхности антигены HLA.  В свою очередь это может быть связано с цитогенетическими изменениями, наблюдаемыми в лимфоцитах крови при описторхозной инвазии. Нами установлено, что частота  клеток с хромосомными аберрациями у  больных описторхозом, имеющих "нуль" антигены, достоверно выше, чем у тех которых определяются оба антигена (соответственно 16,31,1 и 8,20,7%; P<0,01), при этом коэффициент корреляции r=0,68 (P<0,01). Показано, что аналогичная картина наблюдается и при некоторых других гельминтозах - шистосомозе и эхинококкозе (Ameglio F., et al., 1987; Schweitzer A., 1990).

   Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о различии распределения феногентотипов HLA-системы у  больных описторхозом жителей Ханты-Мансийского округа Тюменской области. Это дает нам основание полагать о существовании генетической предрасположенности и устойчивости к развитию описторхозной инвазии.     Анализ распределения HLA-антигенов в зависимости от пола показал существенную гетерогенность: у женщин отмечено повышение частот встречаемости антигенов А3 (25,8 против 10,5% у  мужчин; P<0,05), А28 (12,0 против 1,2%; P<0,01), В35 (18,6 против 8,6; P<0,05). У мужчин - В17 (18 против 4,7 у женщин; P<0,05) и А34 (3,2 против 0%).    Не наблюдалось достоверных отличий в распределении HLA- антигенов в зависимости от возраста.

Установлено, что при малосимптомном течении заболевания достоверно чаще выявляются антигены HLA -А23, В13, В18, В49, Сw2. Риск данного течения описторхоза у носителей этих антигенов увеличивается в 2-8 раз. Отмечено нарастание ассоциаций малосимптомного течения заболевания с фенотипом А2А23 (RR=4,2), В18В55 (RR=5,1) и  гаплотипами А2В13 А11В18 (в обоих случаях RR=5,1). Следовательно, данные фенотипы можно рассматривать как "маркеры" легкого, малосимптомного течения заболевания. Эти гаплотипы распространены в основном среди коренных жителей пос. Русскинские и практически не встречались среди пришлого населения.     Среди больных описторхозом с клинически выраженным течением заболевания, что было, в основном, характерно только для пришлого населения отмечено достоверное повышение частоты встречаемости антигенов А1(33,9%), А25(11,8%), В8(37,8%), В27(15,2%), В35(30,5:%) и Сw2(10,2%). Наличие перечисленных антигенов повышало риск возникновения более тяжелого, манифестного течения заболевания в 3,3 - 4,8 раза. Наиболее значимыми для этой группы больных были фенотипы А1А3 (RR=6,1), В0В27 (RR=6,0) и гаплотипы А0В27 (RR=7,6), А1В8 (RR=4,9), А24В35 (RR=7,6) и А1В0 (RR=7,6). Следует обратить внимание на повышение у этих больных частоты антигенов В27, В35 и гаплотипа  А1В8, для которых найдена отчетливая ассоциация с иммунопатологическими заболеваниями, с чем, возможно, и связано более тяжелое течение заболевания.    Нами было высказано предположение, что, возможно, имеются отличия в мутагенной чувствительности  между  людьми первой  и второй групп. Т.е. возникшая диспропорция обусловлена "селекцией" определенных генотипов, сцепленных с   генами HLA.  Чтобы  ответить правомочно ли это предположение  нами был изучен уровень клеток  с  микроядрами  в  культурах  Т-лимфоцитов, выделенных от лиц,  жителей Ханты-Мансийского округа,  с некоторыми из выше перечисленных антигенов HLA. Культуры Т-лимфоцитов получали из крови, затем в них добавляли дериваты марит описторхисов и инкубировали в течение 48-50 часов. Полученные данные свидетельствуют, что уровень Т-лимфоцитов с микроядрами был  достоверно выше (Р не более 0,05)   в культурах, полученных от людей с антигенами А11, В7 и В18, чем в культурах имеющих антигены Аw25 , В8, В17, Сw6 и Сw5.

 Анализ популяций, пораженных Opisthorchis felineus, по системе антигенов групп крови     Анализ распределения фенотипов и генных частот изученных систем групп крови, Hp  и РТС  в субпопуляциях северных хантов и в целом для популяции свидетельствует об отсутствии полиморфизма по системе Rh (D), преобладании группы крови 0 и фенотипа Hp 2-2, сближающих СХ с монголоидами Северной Сибири. С другой стороны, СХ характеризуются близкими значениями генных частот к некоторым народам финно-угорской  группы по локусам (Io =0,611-06,20) и РТС (t=0,594-0,606) что свидетельствует о про¬межуточном положеним нижнеобских хантов между финно-угорскими на¬родами и монголоидами Северной Сибири. В то же время среди них отмечается своеобразие распределения генных частот по группе крови системы MN и Hp. По этим локусам они занимают промежуточное положение между лесными ненцами и нганасанами и чукчами (Васильев Н.В., 1987), с другой стороны. В этом отношении ханты чрезвычайно сходны с манси, в чем можно убедиться, обратившись к результатам исследования Г.М.Давыдовой (1974) . По локусу  Est-D   северные ханты  более всего сход¬ны с эскимосами и алеутами Аляски (Eriksson et al.,1980). По гену D  в системе Rhesus нами  не было обнаружено полиморфизма все обследованные лица имели резус-положительный фенотип. 

У коренных жителей, легкое, малосимптомное течение заболевания описторхозом наблюдалось, в основном, у имеющих 0 группу крови, В то же время у пришлых такого соответствия не отмечено. Поскольку по этим маркерам полиморфизм изученных популяции незначителен, то мы полагаем, что этот маркер не может быть использован для выделения резистентных к описторхозу групп населения. То же возможно сказать и о группе крови Rhesus и MN.

Следуя классификации Cevalli-Sforze (1999)полученные значения стандартизованных дисперсий следует считать как низкие (f=0,05) и говорить о слабой подразделенности популяции СХ. Теоретически такой низкий уровень генетической дифференциации может быть результатом как общности происхождения этих субпопуляций в недавнем прошлом, так и интенсивностью обмена генами между ними.

Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РГНФ № 13-06-00094