Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 70-й Юбилейной итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 16-18 мая 2011 г.), под ред. В. В. Новицкого, Л. М. Огородовой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. − 430 с.
Актуальность: несмотря на устойчивое снижение заболеваемости, рак желудка сохраняет одно из ведущих мест в структуре онкологической патологии. В России на него приходится 12,7% всех злокачественных новообразований, а по показателю смертности рак желудка занимает второе место (16,7%) [1]. В механизмах развития злокачественных образований неотъемлемую роль играет протеасомная система, осуществляющая деградацию компонентов сигнальных путей клетки, рецепторов ростовых факторов и др. Выделяют 26S и 20S пулы протеасом. 26S пул протеасом осуществляет регуляцию основных процессов в клетке: пролиферацию, апоптоз и др. 20S протеасомы расщепляют аномальные белки и биологически активные пептиды [2]. Протеасомы представлены конститутивными и иммунными формами. Известно, что появление иммунных типов (LMP7, LMP2, PA28) субъединиц в составе протеасом связано с изменением их ферментативной активности [3].
Цель: изучение активности протеасом и их субъединичного состава при раке желудка в связи с клинико-морфологическими параметрами заболевания.
Материалы и методы: группа исследования была представлена 16 пациентами с морфологически верифицированным диагнозом рака желудка (средний возраст 60,4±7,5 лет), проходивших лечение в клиниках НИИ Онкологии СО РАМН. Материалом исследования являлась опухолевая ткань желудка, а также визуально неизменная ткань, находящаяся на расстоянии не менее 2 см от границы опухолей. Тотальная активность протеасом и активность пулов определялась в осветленных гомогенатах опухолевых и неизмененных тканей по гидролизу флуорогенного олигопептида Suc-LLVY-AMC, утилизирующегося химотрипсинподобными центрами протеасом [4]. Разделение протеасом на пулы проводилось методом фракционирования. Белки осветленных гомогенатов фракционировались с помощью сульфата аммония в два этапа: добавлением сульфата аммония до 40% насыщения (26S-протеасом), до 70% насыщения (20S-протеасом) [5]. Субъединичный состав протеасом исследовали методом Вестерн блоттинга. Плотность полос определяли с помощью стандартной компьютерной программы Image J. Результаты выражали в процентах от содержания субъединиц протеасом в неизмененной ткани. Достоверность различий исследовалась при помощи непараметрического критерия Манна-Уитни. Корреляционный анализ проводился c оценкой коэффициента корреляции Спирмена. Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью пакета прикладных программ SPSS 11.5 for Windows.
Результаты: выявлено, что тотальная активность протеасом в ткани рака желудка достоверно выше в 2,3 раза по сравнению с визуально неизмененной тканью. Активность 26S и 20S протеасом в ткани опухоли желудка имела тенденцию к повышению по сравнению с таковой в нормальной ткани. Полученные результаты свидетельствуют об активации протеолитической системы в опухолевой ткани. Экспрессия α1α2α3α5α6α7 субъединиц протеасом была снижена в опухоли до 75,6±12,7% по сравнению с неизмененной тканью. Содержание иммунных субъединиц протеасом LMP7, LMP2 и PA28β повышалась в опухоли соответственно на 131,5%, 71,5% и 51,4%.
При проведении корреляционного анализа выявлено, что содержание LMP2 субъединицы протеасом связано с тотальной активностью (R=-0,532; р=0,034) и активностью 20S пула (R=-0,553; р=0,026) в неизмененной ткани рака желудка. При исследования связи субъединичного состава протеасом с клинико-морфологическими параметрами рака желудка выявлено, что экспрессия α1α2α3α5α6α7 и LMP 7 субъединиц протеасом связана с наличием метастазов в регионарные лимфатические узлы (R=-0496, р=0,05; R=-514 р=0,041 соответственно).
Выводы: таким образом, в ходе исследования обнаружено увеличение активности протеасом и их пулов в ткани опухоли желудка. Выявлена связь состояния протеасомной системы с поражением регионарных лимфоузлов при раке желудка, что имеет важное практическое значение и требует дальнейшего изучения.
Список литературы:
1. Результаты лечения больных раком желудка IV стадии / Ганцев, Ш. Х., Арыбжанов, Д. Т., Кулакеев, О. К. и др. // Сибирский онкологический журнал – 2009. - № 2 (32). – С. 67-69.
2. Множественность форм протеасомы и некоторые подходы к их разделению / Абрамова, Е. Б., Астахова, Т. М., Ерохов, П. А. и др. // Известия РАН. Серия биологическая - 2004. – № 2. – С. 150-156.
3. Almond, J. B. The proteasome; a novel target for cancer chemotherapy / J. B. Almond, G. M. Cohen // Leukemia. - 2002. - Vol. 16. - P.433- 443.
4. 26 S Proteasome-mediated Production of an Authentic Major Histocompatibility Class I-restricted Epitope from an Intact Protein Substrate / S. Ben-Shahar, A. Komlosh, E. Nadav, I. Shaked, T. Ziv, A. Admon, G. N. DeMartino, Y. Reiss // J Biol Chem. - 1999. - Vol. 274, Issue 31. - P. 2196-2197.
5. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr et al // J Biol Chem. - 1951. - Vol. 193. - P. 265–275.
|
