Ивановская государственная медицинская академия , Ивановский государственный химико-технологический университет 
ООО Научно-производственная фирма «Недра»

Данное исследование выполнено в рамках гранта РФФИ № 06-04-08048 «Теоретическое и экспериментальное обоснование бактерицидности препаратов на основе гумусовых кислот торфа». Препараты под общим названием ТОМЕД разработаны в Ивановском государственном химико-технологическом университете.
Ранее нами было доказано стимулирующее действие жидкофазных препаратов торфа на заживление кожных ожоговых ран у крыс и зависимость формирования регенерата от сроков их аппликации и концентрации активного начала – гумусовых кислот. Целью настоящей работы является сравнительное изучение процессов регенерации при использовании различных лекарственных форм этих препаратов (раствор, паста и гель).
Материалы и методы
Эксперимент выполнялся на 20 животных – белых беспородных крысах самцах массой 200-250 г. Ожог диаметром 1 см наносился под эфирным наркозом в струе проходящего пара, на боковой поверхности туловища, с экспозицией 5 секунд. После этого ожоговую рану помещали в капсулу из прозрачного полимерного материала.
Далее животные были разделены на одну контрольную и четыре опытных группы, по 4 особи в каждой. У крыс контрольной группы капсула оставалась пустой, и заживление раны происходило на воздухе, под струпом. Крысам первой опытной группы в капсулу вводили 1% раствор гумусовых кислот объемом 1 мл, второй – пасту с высоким содержанием гумусовых кислот, третьей и четвертой – 1% гидрогель. Смена ее содержимого производилась один раз в сутки. Раны подвергались воздействию препаратов в течение 5 суток у животных контрольной и первых трех опытных групп, 7 суток – в четвертой опытной группе. Далее капсулы снимали у всех животных и отмечали время полной эпителизации дефекта. На 21-е сутки после нанесения ожога в утренние часы проводили эвтаназию. После забора материала готовили срезы и анализировали их при помощи световой микроскопии по следующим параметрам: площадь и толщина эпидермиса над дефектом; количество слоев клеток эпидермиса над дефектом; площадь регенерата и его толщина, измеренная в центральной части среза. Морфометрические исследования проводили на анализаторе изображений с помощью программы «ВидеоТест-Мастер». Достоверность различия средних оценивали по t-критерию Стьюдента.
Результаты и их обсуждение
Во всех опытных группах эпителизация ожоговой раны происходила быстрее, чем в контроле. Лучший по срокам результат был достигнут в первой и второй опытных группах (см. таблицу), причем разница с контрольной группой статистически достоверна (p < 0,05).
При морфологическом исследовании срезов из центральной части дефекта как в контрольной, так и в опытных группах выявляется полностью эпителизированный регенерат на стадии начала замещения грануляционной ткани фиброзной.
У животных всех групп эпидермис в зоне повреждения более или менее гипертрофирован. Наивысшая степень гипертрофии наблюдается у животных контрольной группы: максимальная толщина эпидермиса в этой группе статистически достоверно (p < 0,05) больше, чем во второй, третьей и четвертой опытных (см. таблицу). Эпидермис в опытных группах образует многочисленные впячивания, формируя микрорельеф кожи.
Максимальную площадь эпидермиса над дефектом также имеют животные контрольной группы, причем отличия от всех опытных групп (см. таблицу) статистически достоверны (p < 0,05). Это связано как с большей толщиной эпидермиса, так и с большей его протяженностью над дефектом в контрольной группе ввиду большей площади самого регенерата.
В подлежащей дерме у всех животных наблюдается замещение грануляций фиброзной тканью. У животных контрольной группы формируется неполноценный регенерат рубцового типа. В первой, третьей и четвертой опытных группах формируются более полноценные регенераты по сравнению с контролем. Фиброзная ткань располагается поверхностно, занимая приблизительно 1/3 толщины дермы. Между коллагеновыми волокнами имеются большие промежутки. В регенератах выявляются волосяные фолликулы, сохранившие жизнеспособность под действием препарата торфа.
У животных второй опытной группы регенерат значительно отличается от других опытных групп. Наблюдается формирование глубокого и сравнительно узкого дефекта, затрагивающего внутрикожную мышцу. В нижних слоях располагается скопление лимфоцитов и макрофагов. Выявляются мощные грануляции с большим количеством сосудов, коллагеновые волокна располагаются плотно. Волосяные фолликулы отсутствуют.
Площадь регенерата на срезе в контрольной группе максимальна и статистически достоверно (p < 0,05) превышает значения аналогичного показателя в первой, третьей и четвертой опытных группах (см. таблицу), статистически достоверные различия со второй опытной группой отсутствуют. В опытных группах меньше и толщина образованного регенерата (см. таблицу). Подобные результаты свидетельствуют о сохранении жизнеспособности тканей, прилежащих к первичному ожоговому повреждению, и уменьшении степени вторичной альтерации под влиянием использованных препаратов торфа. Вместе с тем во второй опытной группе толщина регенерата практически не отличается от контрольных значений.
  Таким образом, в нашем исследовании выявлено, что аппликация на ожоговую поверхность всех использованных препаратов торфа стимулирует процессы эпителизации. Однако процессы, протекающие в регенерате под влиянием различных лекарственных форм, по-видимому, имеют существенные различия. Большая часть результатов морфологического анализа и морфометрических данных свидетельствует о том, что растворы и гидрогели с небольшой концентрацией активного начала (гумусовых кислот) оказывают тканесохраняющий эффект и способствуют формированию более полноценного регенерата по сравнению с сухим заживлением. Паста не оказывает такого действия, что может быть связано с высокой концентрацией в ней активных веществ, которые производят дополнительное повреждение тканей, углубляя некроз.

 

Таблица

Данные морфометрии

Группа   Параметр	Контроль	Опыт
		I	II	III	IV
Сроки эпи-телизации, сут.	18,0 ± 2,1	14,5 ± 1,7	14,3 ± 1,7	16,0 ± 2,1	16,8 ± 1,7
Площадь эпидермиса, мм2	0,32 ± 0,04	0,23 ± 0,05	0,13 ± 0,02	0,22 ± 0,01	0,21 ± 0,04
Максимальная толщина эпидер-миса, мкм	117, 44 ± 19,25	97,56 ± 15,56	67,90 ± 13,30	83,21 ± 17,9	84,92 ± 10,56
Количество слоев эпидермиса	3 – 14	2 – 12	3 – 9	3 –10	3 – 10
Площадь регенерата, мм2	2,25±0,41	1,49 ± 0,37	1,60 ± 0,83	1,54 ± 0,45	1,44 ± 0,27
Толщина регенерата, мм	1,12 ± 0,25	0,85 ± 0,28	1,07 ± 0,51	0,92 ± 0,05	0,61 ± 0,13