|
ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава, (г. Томск)
Эта работа опубликована в сборнике "Науки о человеке": материалы Х конгресса молодых ученых и специалистов / Под ред. Л.М.
Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2009. – 166 с.
Скачать сборник целиком
Процесс программированной клеточной гибели в настоящее время рассматривается в качестве ключевого механизма регулирования иммунных реакций. IL-2, являясь фактором, определяющим жизнедеятельность иммунокомпетентных клеток, обладает двойственным влиянием на реализацю танатогенной программы [1]. Между тем, вопрос относительно молекулярных мишеней, задействованных в передаче сигнала, опосредованного данным медиатором, остается открытым. В связи с этим целью настоящего исследования явилось изучение роли белков Р53 и NFkB в реализации IL-2-опосредованного апоптоза лимфоцитов.
Материал и методы. В эксперименте in vitro использовали лимфоциты крови, полученные у 12 здоровых доноров (5 мужчин и 7 женщин в возрасте 22-30 лет). Выделенные на градиенте плотности Ficoll-Paque («Pharmacia», Швеция) клетки культивировали в течение 18 ч при 37оС и 5% СО2 в чистой среде RPMI-1640 («Вектор-Бест», Новосибирск) либо в среде с добавлением рекомбинантной формы IL-2 (rIL-2) («Biosurce», США) в дозе 0,1 нг/мл. Исследование реализации апоптоза лимфоцитов осуществляли с помощью проточной цитометрии в аннексиновом тесте с добавлением пропиди-ум йодида («Beckman Coulter», США) [2]. Для оценки содержания транскрипционных факторов NFkB и P53 применялся метод вестерн-иммуноблоттинга. Статистическую обработку результатов проводили с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение. При культивировании in vitro лимфоцитов с добавлением rIL-2 было зарегистрировано достоверное повышение уровня апоптоза относительно интакной культуры, сопровождающееся увеличением уровня транскрипционного фактора NFkB, что свидетельствует о его заинтересованности в проведении опосредованного IL-2 апоптотического сигнала. В то же время в исследуемой культуре отмечалось достоверное снижение содержания нефосфорилированного Р53. Выявленный факт может указывать на избыточное накопление активной фосфоформы данного белка, задействованной в реализации клеточной гибели.
Таким образом, в результате проведенного нами исследования установлено, что IL-2 способен оказывать проапоптотический эффект в отношении лимфоцитов, реализуемый при участии транскрипционного фактора NFkB и Р53.
Список литературы:
1. Annexin V-affinity assay: a review on an apoptosis detection system based on phosphatidylserine exposure / M. Van Engeland, L.J. Nieland, F.C. Ramaekers et al. // Cytometry. - 1998. - Vol. 31, N 1. - P.1-9.
2. Molecular mechanisms of activated T cell death in vivo / D.A. Hildeman, Y. Zhu, T.C. Mitchell et al. / Curr. Opin. Immunol. - 2002. - № 14. - P. 354-359.
|
