Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

Известно, что гранулематозные заболевания имеют широкое распространение [1]. По этому изучение аспектов функционирования многоядерных макрофагов не вызывает сомнения, так как эти клетки играют важную роль в образовании и развитии гранулем, а генетически обусловленные различия реагирования макрофагов определяют характер иммунного ответа [2]. Изучение этих процессов позволило бы учитывать особенности поведения полинуклеарных макрофагов, в том числе и при коррекции гранулематозных заболеваний. Идентификация клеток с микроядрами является информативным методом [3], дающим возможность определить адекватность их функционирования.
 Цель исследования состояла в изучении влияния генетической принадлежности культур и длительности их инкубации на морфологически проявления особенностей функционирования и взаимодействия  перитонеальных клеток при длительной инкубации in vitro. Задачи исследования включали: определение частоты встречаемости многоядерных и одноядерных макрофагов с признаками кариопатологических изменений и наличием микроядер, выявление клеток с дистрофическими изменениями, и определение активности дегрануляции лаброцитов.
Клетки выделяли из брюшной полости мышей линий C57BL/6 и CBA. Концентрация посадки составляла 1000 тыс. перитонеальных клеток в 1 мл взвеси. Определяли относительное содержание клеток, имевших в своем составе микроядра и частоту встречаемости макрофагов с признаками кариопатологических изменений. Результаты оценивали на 48, 72, 96 и 120 часов инкубации. Контролем служили культуры, инкубируемые в течение 48 часов.
Количество клеток с признаками дистрофических изменений на 96 часов экспозиции в культурах группы СВА было в 1,8 раза больше, чем в культурах группы C57BL/6. В культурах группы C57BL/6 на 96 часов инкубации наблюдали более активную дегрануляцию лаброцитов, чем в культурах группы СВА. Это объясняет крайне низкое содержание этих клеток (в культурах группы C57BL/6) на 120 часов экспозиции. Данное явление косвенно подтверждается присутствием гранул лаброцитов в макрофагах.
На 72 часа инкубации в культурах группы СВА одноядерных макрофагов, имевших патологические изменения в ядрах (включая наличие микроядер в клетках), было в 1,5 раза больше, чем  мононуклеарных фагоцитов в культурах группы C57BL/6. При увеличении сроков экспозиции культур перитонеальных клеток было отмечено снижение численности многоядерных фагоцитов, содержащих микроядра. Данное явление, вероятно, объясняется активизацией апоптоза фагоцитов, вследствие которого эти клетки погибают на предшествующие сроки инкубации. Достоверные межгрупповые различия по данному показателю отсутствовали.
На 72 часа экспозиции в культурах группы СВА полинуклеарных клеток, имевших патологические изменения ядра, было в 1,7 раза больше, чем в группе C57BL/6. На поздних сроках инкубации межгрупповые различия не отмечали. В культурах группы C57BL/6 наиболее часто наблюдали наличие клеток с патологическими изменениями в нескольких ядрах. У макрофагов в культурах группы СВА преимущественно находили изменения в одном ядре на все сроки инкубации. Характерно, что численность многоядерных фагоцитов в культурах группы C57BL/6 на 120 часов экспозиции было в 2,2 раза меньше, чем в группе культур СВА.
Таким образом, истощение концентрации питательных веществ закономерно приводило к развитию дистрофических изменений у фагоцитов в культурах группы СВА, а накопление продуктов метаболизма влекло за собой активную дегрануляцию лаброцитов в культурах группы C57BL/6 на 96 часов инкубации. Одноядерные макрофаги с признаками патологических изменений в ядрах чаще встречались в культурах группы СВА на 72 часа наблюдения. Увеличение сроков экспозиции культур вызывало нивелирование генетически детерминированных особенностей реагирования перитонеальных клеток. Полинуклеарные фагоциты в культурах группы C57BL/6 на поздних сроках экспозиции были менее устойчивы к дефициту питательных веществ и избытку продуктов метаболизма, чем многоядерные клетки в культурах группы СВА. Это подтверждалось как снижением численности макрофагов в культурах группы C57BL/6, так и увеличением частоты встречаемости патологических изменений в нескольких ядрах по сравнению с параметрами группы СВА. Количество многоядерных клеток с микроядрами снижалось при возрастании времени экспозиции культур в следствии апоптоза в обеих группах, так как эти фагоциты были менее резистентны.
Отмеченные изменения были обусловлены генетически детерминированными особенностями реагирования клеток и зависели от сроков инкубации культур. Полученные результаты могут быть использованы при моделировании очагов хронического воспаления с различным уровнем активности развития кариопатологических изменений в макрофагах, что является важным этапом на пути создания новых эффективных методов коррекции гранулематозных заболеваний.

 

Список литературы:
1. Васильев А.В., Гришко А.Н. Аспекты эпидемиологии // Внелёгочный туберкулёз. СПб., 2000. – С.11-33.
2. Ильин Д.А., Архипов С.А Сравнительная оценка функциональной и интегративной активности макрофагов и лаброцитов в генотипически различных культурах перитонеальных клеток // VII всероссийская конференция по патологии клетки. Москва, 2005. – С. 56 – 57.
3. Moore F.R., Urda G.A., Krishna G., Theiss J.C. An in vivo/in vitro method for assessing micronucleus and chromosome aberration induction in rat bone marrow and spleen. 1. Studies with cyclophosphamide // Mutat. Res. - 1995. - V. 335. - № 2. - Р. 191-199.