Иркутский государственный медицинский университет Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2005 год, Том 2, выпуск 3), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника
Метод ВЭЖХ позволяет определять содержание основного действующего вещества в присутствии специфических примесей и продуктов деструкции. В качестве объектов исследования нами выбраны противотуберкулезные лекарственные средства производные пиридина - изониазид, фтивазид, метазид, имеющие широкое применение в медицинской практике. Для анализа использовали обращенно-фазный вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии. Все эксперименты выполнялись на микроколоночном высокоэффективном жидкостном хроматографе «Милихром-А02». При выборе хроматографических условий добивались полного разделения основных веществ и продуктов деструкции. Учитывая, что молекулы исследуемых сорбатов (изониазид, метазид, фтивазид, а также примеси: изоникотиновая кислота и ванилин) полярны и, согласно теории Хорвата, будут незначительно «прижиматься» к гидрофобной поверхности сорбента в виду способности образовывать водородные связи с неполярными компонентами подвижной фазы, для них целесообразно использовать в качестве подвижной фазы воду с небольшими добавками ацетонитрила. Оптимальными условиями хроматографирования для метазида и фтивазида являются: градиентное элюирование в системе 0,05М фосфатный буфер с рН 3,0-ацетонитрил с линейным увеличением доли органического компонента от 5 до 80% за 10 минут при расходе элюента 200 мкл/мин. При использовании кислого элюента изониазид имеет очень малое время удерживания, поэтому его анализ проводили в основном элюенте: 0,05М ацетатный буфер, доведенный триэтиламином до рН 8,0 - ацетонитрил при градиентном элюировании с повышением доли органического компонента от 0 до 40% за 10 минут при расходе элюента 200 мкл/мин.
Методом остановки потока были записаны УФ-спектры изучаемых веществ и определены их максимумы поглощения. Регистрация хроматограмм проводилась при длинах волн, соответствующих значениям коротковолновых максимумов. Детектирование метазида проводили при 270 нм, фтивазида - при 330 нм, изониазида - при 266 нм.
Исследуемые растворы в метаноле концентрации 0,1 мкг/мл вводили в колонку. Объем вводимой пробы равнялся 4 мкл. Время анализа - 7 минут.
Время удерживания для изониазида составило 3 минуты, а для его специфической примеси - изоникотиновой кислоты - 2 минуты. Время удерживания для фтивазида составило 4 минуты, а для ванилина - 4,5 минуты. Время удерживания метазида составило 3,5 минуты, а для изониазида в этих условиях - 1,5 минуты.
Количественное определение исследуемых веществ проводили методом внешнего стандарта. В качестве образцов сравнения использовали изониазид, метазид и фтивазид, перекристаллизованные из этилового спирта. Расчеты выполняли с использованием компьютерного программного обеспечения «Мультихром». Результаты количественного определения изониазида, метазида и фтивазида методом ВЭЖХ приведены в таблице.
Таблица Результаты количественного определения изониазида, метазида и фтивазида методом ВЭЖХ | Лекарственное вещество | Метрологические характеристики (n=7, P=95%) | | 
| S2 | S | S | DХ | Е% | Sr | | Изониазид | 99,58 | 0,525 | 0,725 | 0,274 | 0,67 | 0,67 | 0,007 | | Метазид | 99,59 | 0,599 | 0,774 | 0,290 | 0,72 | 0,72 | 0,008 | | Фтивазид | 99,71 | 0,457 | 0,676 | 0,256 | 0,63 | 0,63 | 0,007 | Из представленных данных видно, чторазработанные методики отличаются высокой точностью, воспроизводимостью, экспрессностью и могут быть рекомендованы для производственного контроля качества данной группы лекарственных средств. |
