Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 70-й Юбилейной итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 16-18 мая 2011 г.), под ред. В. В. Новицкого, Л. М. Огородовой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. − 430 с.

 

Скачать сборник (формат MS Word, 7,3 мб)

Посмотреть основную информацию о сборнике, обложку и т.д.

 

Актуальность: исследования последних лет показали, что процессы свободнорадикального окисления играют ключевую роль в патогенезе заболеваний гепатобилиарной системы. В результате свободнорадикального окисления образуются активные формы кислорода, наиболее реакционноспособным из которых является  гидроксильный радикал [3]. В связи с этим в терапии заболеваний печени широкое применение находят препараты, обладающие мембраностабилизирующими и антиоксидантными свойствами [1]. Основной группой гепатопротекторов (более 50%) являются средства растительного происхождения.

В этом плане значительный интерес представляет оксим пиностробина, являющийся полусинтетическим производным флавоноида пиностробина, выделенного из почек тополя бальзамического (Populus balsamifera L) [2]. Так же особый интерес представляет леукомизин – сесквитерпеновый лактон гвайанового типа, выделенного из полыни беловатой (Artemisia leucodes Schrenk). Леукомизин является действующим веществом зарегистрированного на территории Республики Казахстан препарата «Атеролид», обладающего гиполипидемической и антисклеротической активностью. Для веществ c гиполипидемическим действием рекомендовано исследование их антирадикальных и антиоксидантных свойств.

Цель настоящей работы – изучение антирадикальной активности оксим пиностробина и леукомизина по отношению к гидроксильному радикалу in vitro.

Материалы и методы: генерацию гидроксильного радикала осуществляли в реакции Габера-Вейса в присутствии дезоксирибозы [4]. Сущность метода состоит в том, что под влиянием гидроксильного радикала происходит деградация дезоксирибозы до малонового альдегида (МДА). МДА определяли по реакции его взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), которая протекает при температуре 95-100⁰С в кислой среде с образованием окрашенного триметинового комплекса с максимумом поглощения при длине волны 532 нм.

Контрольная проба общим объемом 1 мл содержала 1 мМ КН₂РО₄-КОН буфера (рН7,4), 0,1 мМ FeCl₃, 2 мМ ЭДТА, предварительно смешанных в равных объемах, 0,1 мМ аскорбиновой кислоты и 2,8 мМ дезоксирибозы. Реакцию запускали добавлением 1 мМ Н₂О₂.

Исследуемые вещества вводили в реакционную смесь в виде водных суспензий, предварительно обработанных в течении 3 минут с помощью ультразвукового диспергатора (модель XL2005 Heat system inc. N.Y.) с частотой 22 кГц и мощностью 10 Вт. Конечные концентрации оксима пиностробина, леукомизина и препарата сравнения – маннитола (USP Reference Standard) составили 50, 250, 500 мкг/мл.

Контрольные и опытные пробы инкубировали 1 час при температуре 370С. Далее к 0,5 мл реакционной среды прибавляли 1 мл 0,8% ТБК и 1 мл 2,8% трихлоруксусной кислоты (ТХУ), смесь помещали в кипящую водяную баню на 15 мин, охлаждали и затем измеряли оптическую плотность на спектрофотометре СФ-2000 (ОКБ «Спектр», Россия) при длине волны 532 нм против контроля, содержащего 0,5 мл 20мМ КН₂РО₄-КОН буфера, 0,5 мл 0,8% ТБК и 0,5 мл 2,8% ТХУ.

На основании кривой доза-эффект рассчитывали IC50 – концентрацию исследуемых соединений, при которой наблюдалось 50% ингибирование образования МДА из дезоксирибозы под действием гидроксильного радикала.

Результаты: в ходе проведенных исследований установили, что оксим пиностробина и леукомизин статистически достоверно снижали уровень МДА в исследуемых концентрациях (50-500 мкг/мл). IC50 составили для оксим пиностробина и леукомизина 358±22 и 372±17 мкг/мл соответственно. При этом препарат сравнения – маннитол – уже в концентрации 54,3±18,6 мкг/мл снижал уровень МДА на 50% (рис. 1).

 

Рис. 1. Влияние оксима пиностробина, леукомизина и маннитола на образование МДА

Таким образом, способность оксима пиностробина и леукомизина взаимодействовать с гидроксильным радикалом в 7-10 раз хуже, чем у классической ловушки ОН-радикала – маннитола.