Новосибирский государственный медицинский университет, г.Новосибирск
Кафедра фармакогнозии и ботаники

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,4 мб)

 

Актуальность: Pyrola rotundifolia L. (Грушанка круглолистная) – многолетнее травянистое растение семейства Pyrolaceae (Грушанковых). Настой листьев этого растения, издавна используется в народной медицине как средство, обладающее мочегонным, вяжущим, противоспазматическим, противовоспалительным и антисептическим действием. Применяется чаще всего при хроническом воспалении почек и мочевого пузыря (гнойная моча), воспалительных заболеваниях женских половых органов, спастических явлениях в желудочно-кишечном тракте [2,3,4].
Мочегонное и антисептическое действие P.rotundifolia L., обусловлено наличием в листьях фенольного гликозида арбутина [3]. Поэтому целью нашего исследования являлось определение количественного содержания арбутина в листьях растения.
Материал и методы: Объектами исследования являлись листья P.rotundifolia L., собранные в Кудряшовском бору Новосибирской области в фазу цветения.
Для фитохимического исследования получали извлечение из листьев растения трехкратной экстракцией по 30 минут при соотношении сырья и экстрагента 1:30. Экстрагентом являлся 40% водно-спиртовый раствор, степень измельчения сырья 1 мм. В полученном извлечение определяли наличие арбутина с помощью цветных реакций (с раствором закисного железа, натрия фофорно-молибденовокислого) [1]. Также использовались хроматографические методы анализа (бумага Ленинградская-средняя и FN-6A; система растворителей – 2% уксусная кислота, 1% хлористоводородная кислота соответственно). Идентификацию проводили по свечению в УФ-свете до и после обработки хроматограмм 10% спиртовым раствором натрия гидроксида, по окраске пятен после реакции азосочетания (1% раствор диазотированной сульфаниловой кислоты) и по величине Rf в сравнении со стандартным образцом.
Определение количественного содержания арбутина проводили следующими методами:
1. Прямым спектрофотометрическим методом (СФ-метод). Измерение оптической плотности проводили на приборе СФ–56 при длине волны 281 нм. Предварительно был построен калибровочный график с использования РСО арбутина.
2. Спектрофотометрическое определение с предварительным осаждением полифенольных соединений раствором свинца ацетата основного (СФ+ацетат свинца). К аликвоте извлечения добавили раствор свинца ацетата основного до насыщения, подогревали для коагуляции осадка. В фильтрате определяли содержание арбутина спектрофотометрическим методом.
3. Хроматоспектрофотометрическими методами (ХСФ):
3.1. Хроматография на бумаге (ХСФ на бумаге): аликвоту извлечения наносили на бумагу Ленинградскую-среднюю в четырех повторностях, система растворителей – 2% уксусная кислота. Хроматограммы просматривали в УФ-свете, отмечали границы пятен арбутина (в УФ-свете свечение голубого цвета), вырезали, измельчали и проводили четырехкратное элюирование 40% спиртом этиловым при нагревании. В элюате определяли содержание арбутина спектрофотометрическим методом.
3.2. Колоночная хроматография с силикагелем (ХСФ силикагель): стеклянную хроматографическую колонку диаметром 1,0 см и высотой 15 см заполняли силикагелем для хроматографии (L 100/250). Сорбент предварительно в колонке промывали 20% спиртом этиловым. Аликвоту извлечения упаривали до небольшого объема, смешивали с силикагелем, наслаивали на силикагель в колонке и элюировали 20% спиртом этиловым. Элюат собирали по 3 мл и определяли содержание арбутина на спектрофотометре.
3.3. Колоночная хроматография с алюминия оксидом (ХСФ алюминий): стеклянную хроматографическую колонку диаметром 1,0 см и высотой 15 см заполняли алюминия оксидом нейтральным для хроматографии второй степени активности. Сорбент предварительно в колонке промывали 40% спиртом этиловым. Аликвоту извлечения упаривали до небольшого объема, смешивали с алюминия оксидом, наслаивали на алюминия оксид в колонку и элюировали 40% спиртом этиловым. Элюат собирали по 3 мл и определяли содержание арбутина спектрофотометрическим методом.
Результаты исследования:
В ходе проведение цветных реакций был обнаружен арбутин в листьях P.rotundifolia L.
В результате хроматографического анализа в УФ-свете до и после обработки хроматограмм 10% спиртовым раствором натрия гидроксида были обнаружены пятна голубого цвета. После реакции азосочетания – красные пятна. Проявившиеся пятна исследуемого извлечения и раствора свидетеля по цвету и значениям Rf совпадали. В системе 2% уксусная кислота Rf=0,79; 1% хлористоводородная кислота Rf=0,81
Результаты количественного определения арбутина различными методами представлены в таблице 1

Таблица 1

Результаты количественного определения арбутина в листьях P.rotundifolia L. различными методами

Метод	СФ-метод	СФ+ацетат свинца	ХСФ на бумаге	ХСФ силикагель	ХСФ алюминий
Содержание арбутина	3,51%	1,75%	0,54%	-----	0,6%

В ходе хроматоспектрофотометрического метода с использованием колонки заполненной силикагелем характерного пика поглощения арбутина не наблюдали.
Выводы:
В результате проведенных исследований на основании цветных реакций, бумажной хроматографии в листьях P.rotundifolia L. идентифицирован арбутин.
Определено количественное содержание арбутина различными методами.

Список литературы:
1. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2 Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР – 11-е издание. – М. : Медицина, 1989. – 400 с. 
2. Крылов, Г. В. Зеленая аптека Кузбасса / Г. В. Крылов. – Кемерово : Кемеровское книжное издательство, 1979. – 232 с.
3. Пензина Т.Н. Фармакологическая активность некоторых растений семейства Грушанковых: Автореф. Дисс. / Т.Н. Пензина. – Барнаул, 1999.
4. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Paeoniaceae – Thymelaceae / Отв. Ред. П. Д. Соколов. Л.: Наука, 1986. – 336 с.