|
ЯНЦ РАМН Правительства РС (Я), Иванова З.С., кафедра ВМС И ОХ ЯГУ (г.Якутск)
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам пятого конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» / Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича.- Томск, СибГМУ.- 2004.- 413 с.
Скачать сборник целиком
В условиях дефицита и дороговизны синтетических лекарственных препаратов особенно актуальным становится изучение и использование веществ природного происхождения. Среди биологически активных веществ (БАВ), выделенных из растений большой практический интерес представляют соединения, относящиеся к группе природных флавоноидных соединений.
Известно, около 4000 природных флавоноидных веществ и выявлено свыше 40 видов их биологического действия. Последнее обусловлено тремя причинами: антиоксидантным действием, мембранностабилизирующей способностью и многообразием влияния на ферментные системы. Они влияют на азотистый обмен, обладают капилляроукрепляющими, гепатопротекторными, противовоспалительными, спазмолитическими, противоаллергическими, антимикробными, антисклеротическими и желчегонными действиями [1].
Флавоноиды оказывают влияние на энзиматическую активность, угнетая гиалурони-дазу, а также гистидиндекарбоксилазу и холинэстеразу. Кроме того, флавоноиды проявляют седативное действие, а также эстрогенную активность. Отмечено их положительное влияние при лучевой болезни и опухолей, оказывают ингибирующее действие на транспортную АТФазу. Некоторые из флавоноидов обладают антианафилактическим эффектом. Их с успехом применяют при лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.
В настоящее время флавоноиды, в частности, кверцетин проходит первую фазу клинических испытаний в качестве потенциального противоопухолевого препарата. Известно, что генистеин оказывает непосредственное ингибирующее воздействие на рост опухолевых клеток.
Наряду с вышеуказанными богатыми свойствами, флавоноиды также нашли широкое применение в области косметологии.
Флавоноиды образуются всеми растительными организмами: в большей мере - цветковыми растениями, в меньшей - мхами, хвощами и папоротниками.
В чистом виде флавоноиды представляют собой кристаллические соединения с определенной температурой плавления, желтые (флавоны, флаванолы, халконы), бесцветные (изофлавоны, катехины, флаваноны, флаванонолы), а также окрашенные в красный или синий цвет (антоцианы) в зависимости от рН среды. Флавоноиды практически не токсичны [2].
Целью данной работы явилось изучение индивидуального состава флавоноидов и стероидных гликозидов в пижме обыкновенной.
Объект исследования - пижма обыкновенная Tanacetum vulgarel, семейство астровых. Растение 40-60 см высотой, с относительно облиственными стеблями и с укороченными вегетативными побегами в виде розеток прикорневых листьев, обильно опущенными длинными, простыми волосками. Язычковые цветки в количестве 15-30, желтые, с трубкой венчика 2-2,5 см длиной. Семянки 1,5-3,5 мм длиной [3].
Сырье сушили в помещении при комнатной температуре, до максимальной потери влаги.
Навеску растительного сырья измельчили и экстрагировали смесью вода-этанол 1:1. Настаивали в темном месте в течение 4 суток. После отгонки спирта, экстракт обрабатывали органическими растворителями. Получили 3 основных фракций: хлороформенную (1 Ф), этилацетатную (2Ф) и бутанольную (3Ф).
В качестве сорбента для разделения флавоноидных соединений использовали активированный силикагель, марки L 100/160 м Chemarol. Колонку размером 2,5*100 заполняли мокрым способом. Для этого силикагель (50 г) смешивали с растворителем (хлороформ-метанол 9:1, элюент) и в виде суспензии вносили в колонку. Исследуемый экстракт (1 Ф - 2,1 г, 2Ф - 1,8 г) растворяли в элюенте, смешивали с 5 г силикагеля и сушили при комнатной температуре. Затем каждую фракцию, различающуюся по цвету, исследовали на присутствие флавоноидов методом ТСХ (силуфоловые пластинки АРМ СОРБ, ТСХ-КСКГ-УФ, сорбент силикагель КСКГ, подложка - алюминиевая фольга, связующее крахмал, зернение 5-20 мкм, толщина слоя 100+10 мкм, размер пластин 15*15). Обнаружение флавоноидных соединений на ТСХ проводили проявлением хроматограмм 10%-ным раствором хлористого алюминия, с последующим УФ-облучением. Полученные фракции идентифицировали методом хромато-масс-спектрометрии.
Для определения индивидуального состава флавоноидов использовали хромато-масс-спектрометр Avtogigtem XL c Q-масс 910, фирмы Perkin Elmer, капиллярная колонка диаметром 0,25 м, длиной 90 м с импрегнированной фазой РЕ-5. Диапазон температур 20-300° С, с подъемом температуры на 5° С/мин. Газ-носитель - гелий (давление 24 psi). Скорость подачи 3 мг/мин.
Для исследования на колоночной и тонкослойной хроматографии использовали хлороформенную (1 Ф) и этилацетатную фракции. В хлороформенном экстракте наблюдали две основные фракции: темно-зеленого и желтого цвета. В темно-зеленой фракции содержались в основном хлорофиллы и вещества липофильного характера. После проявления 10%-ным раствором хлористого алюминия и УФ-облучении, в желтой фракции наблюдали одно размытое пятно с ярко-желтой флуоресценцией с Rf=0,509. Менее полярные флавоноидные соединения были сосредоточены в этилацетатной фракции. В ней наблюдали два желтых пятна с Rf1= 0,284 и с Rf2=0,623.
При кристаллизации из 1Ф и 2Ф выпали кристаллы желтого цвета. Выход флавоноидных веществ, представлен в таблице 1.
|
Таблица 1
Содержание флавоноидньгх веществ в хлороформенной и этилацетатной фракциях
|
| Растительное
сырье |
Вес сырья в (г) |
Фракции, вес в (г) и
выход в % от а.с.в. сырья |
| Цветки |
1100 (100%) |
1Ф (хлороформенная
фракция) |
2Ф (этилацетатная фракция) |
| 2Ф-1' |
2Ф-2' |
2Ф-3' |
| 2,405
(0,28%) |
2,321 (0,21%) |
1,845 (0,16%) |
1,446 (0,13%) |
Таким образом, суммарное содержание биофлавоноидов в цветках пижмы обыкновенной было равно 8,017 г, что составляет 0,78%.
По данным Макарова А.А, в листьях и цветках пижмы обыкновенной, произрастающей в Центральной Якутии, содержатся 0,3-0,6% флавоноидов, дубильных веществ и эфирных масел, основными компонентами которых являются: а, β-туйон, а также камфора, туйол, борнеол и пинен [4].
Идентификация индивидуального химического состава биологически активных веществ в исследуемом экстракте было произведено методом хромато-масс-спектрометрии. Нами выявлены следующие низкомолекулярные компоненты: метоксифенол, ацетальдегид, гидрохинон, бутинилциклогексанон, тимол, камфора, 4-метилбензен, метанол, 4-терпиенол, 2-метил-4-пропенилфенол, 2-метил-4пропенилфенол, бензойная кислота, 2-гидрокси-3-фенил-2-пропеновая кислота, 2-метилбутеновая кислота, 3-ацетил-5-холеиновая кислота, 3-метокси-4-гидроксибензойная кислота, 3-циклоундекановая кислота, азелаиновая кислота, октадекановая кислота и гексадекановая кислота.
Ниже приводим названия идентифицированных нами флавоноидов: 2-(4'-гидрокси)-фенил-3,7-диметокси-5-гидроксибензопиран-4-он; 2-(4'-гидрокси)-фенил-5-гидрокси-6,7-диметоксибензопиран-4-он; 2-(3',4-диметокси)-фенил-5,7-дигидроксибензопиран-4-он;
2-(3'-метокси, 4'-гидрокси)-фенил-5-гидрокси-7-метоксибензопиран-4-он; 2-(3'-метокси, 4'-ацетилокси)-фенил, 5-ацетилокси-7-метоксибензопиран-4-он; 2-(4'-метокси)-фенил-3,5-дигидрокси-7-метоксибензопиран-4-он; 2-(4'-метокси)-фенил-3-метокси-5,7-дигидрокси-бензопиран-4-он; 2-фенил-5,7-диметоксибензопиран-4-он; 2-фенил-3,5,7-триметокси-бензопиран-4-он; 7,7'Д8',11,12-гексагидро^г^1-каротен; 2-(3',4'-дигидрокси)-фенил-6,8-ди-с-Д-глюкопиранозилбензопиран-4-он.
Многообразие флавоноидов обусловлено, наличием различных радикалов в ароматической части молекулы - кольцах А и Б, степенью гликозилирования, местом присоединения углеводных остатков и их природой. У обнаруженных флавононов радикалы R^Qrl^, -ОН, ацетилокси- сосредоточены в кольце Б в положениях: 4' - ацетилокси-, 3', 4' - -ОСН3; а в кольце А в положениях 3, 5, 6, 7 - R^Qr^, 5, 7 -
Кроме того, идентифицированы стероидные компоненты: ацетатстигмастадиен-5,22-ола3; 3-метоксистигмастадиен-5,22; ацетат-4,4-диметилхолестен-7-ола-3; ацетатхолестен-8-ола-3. В результате исследования пижмы обыкновенной следующие выводы:
Суммарное содержание биофлавоноидов в цветках пижмы обыкновенной, произрастающей в Западной Якутии выше, чем в Центральной Якутии и равно 8,017 г, что составляет 0,78%.
Хромато-масс-спектрометрический анализ позволил установить химическую структуру - 20 низкомолекулярных антиоксидантов, 11 флавоноидов и 4 стероидных соединений в метанольных экстрактах.
Проведенные нами исследования свидетельствуют о том, что спектр применения пижмы обыкновенной, не ограничивается использованием ее только в качестве желчегонного средства.
Литература:
1. Запрометов М.Н.. Фенольные соединения. Распространение, метаболизм и функции в растениях.-М.:Наука, 1993.- 310 с.
2. Казаков А. Л., Бандюкова В. А., Шинкаренко А. Л.. Биофлавоноиды. Строение и распространение их в растениях//Растительные ресурсы. -1998, т. 8, вып. 1. с.- 140-149.
3. Лекарственные растения и их применение.- Владивосток: МП "Экслибрис", 1992.- 240 с.
4. Макаров А. А.. Биологически активные вещества лекарственных растений Якутии.- Якутск: ЯНЦ СО АН СССР, 1989.- 156 с.
|
