|
ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»(г. Красноярск)
Начало применения развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ) для выращивания вирусов приходится на 1928-1935 годы. Этот период австралийский ученый Бернет назвал «первой золотой эпохой» развития вирусологии, поскольку она открыла возможность культивирования вирусов в довольно удобной живой лабораторной модели - в развивающихся куриных эмбрионах, как правило, интактных по отношению ко многим возбудителям инфекционных болезней. В КЭ способны развиваться большинство вирусов. Это обусловлено тем, что куриный эмбрион содержит четыре различных естественных питательных субстрата для размножения вирусов: амнион, аллантоис, хориоаллантоисную мембрану и желточный мешок, клетки которых, как и клетки самого эмбриона, являются высокочувствительными к различным вирусам. Вследствие этого куриные эмбрионы пригодны для выделения вирусов из патологического материала, получения антигенов, определения титров инфекционности вирусов, постановки реакций нейтрализации и т.д. В силу высокой производительности и накопления некоторых вирусов РКЭ используют как модель для получения вакцин против ряда заболеваний животных и человека.
Способ культивирования вирусов в аллантоисной полости куриных эмбрионов в биопромышленности используется при получении антигенов для диагностики гриппозных инфекций у людей, лошадей, птиц, а так же для получения живых и инактивированных вакцин против гриппа у людей, животных и птиц инфекционного ларинготрахеита птиц, болезни Ньюкасла (БН) птиц.
Целью данной работы явилось проведение бактериологического контроля аллантоисной жидкости второго пассажа, полученной от куриных эмбрионов зараженных вирусом болезни Ньюкасла. Бактериологическому контролю подвергали аллантоисную жидкость полученную от куриных эмбрионов зараженных в 10-ти дневном возрасте вакцинным штаммом «La-Sota» вирусной болезни Ньюкасла. Куринные эмбрионы культивировали при t 37,5 0С и влажности 60-70%. Ежедневно овоскопировали проверяя их на жизнеспособность. Первую группу КЭ культивировали 72 часа (№1-5), вторую – 120 часов (№6-10). Для бактериологического контроля аллантоисной жидкости использовали искусственные питательные среды: мясо- пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ), агар Эндо (для выявления кишечной палочки), агар Сабуро (для выявления плесневелых и дрожжевых грибов) при комнатной температуре. Бактериологические исследования проводили по общепринятой методике.
Куриные эмбрионы после 72 часов и 120 часов культивирования в них вируса БН вскрывали в боксе стерильными инструментами, скорлупу обрабатывали йодированным спиртом, рабочую поверхность фламбировали. Отсасывали пипеткой аллантоисную жидкость, которую сразу же подвергали бактериологическому контролю на стерильность путем высева на искусственные питательные среды: МПА; МПБ; Эндо; Сабуро. Считали исследуемый материал - вируссодержащим материалом для следующего пассажа.
Результаты учитывали на первые, вторые и третьи сутки культивирования по наличию роста на МПБ, МПА, Эндо, Сабуро; характеру роста; при наличии роста готовили из МПБ и колоний на МПА мазки, окрашивали их по Граму, а затем изучали путем микроскопирования.
Результаты бактериологического исследования аллантоисной жидкости показали, что в исследуемом материале: №1- МПБ незначительное помутнение без осадка; №3- МПБ помутнение без осадка; №6- МПБ помутнение и наличие значительного осадка, на МПА сплошной рост и отдельные мелкие сочные непрозрачные колонии серо-белого цвета, микроскопия мазков, полученных из МПБ и колонии на МПА- грамположительные короткие цепочки кокков; №7- МПБ помутнение и незначительный осадок; на МПА – серо-белая сочная непрозрачная колония размером 0,3 см, микроскопия препаратов – скопление грамположительных кокков.
Таким образом, аллантоисные жидкости №6 и №7 уничтожить и не использовать материал для заражения.
Аллантоисную жидкость №3 обработать антибиотиками по 100ЕД/мл экспозиция 60 минут при комнатной температуре, а затем повторить бактериологический контроль.
Необходимо добавить в вируссодержащий материал №2,4,5,8,9,10 по 100ЕД/мл пенициллина и стрептомицина и использовать его для последующего заражения КЭ.
|
