|
Авторы: Фадеева Е.В., Лебединская О.В., Четвертных В.А., Годовалов А.П.
ГОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Росздрава (г. Пермь)
Эта статья опубликована сборнике научных трудов "Фундаментальные науки и практика" с материалами Третьей Международной Телеконференции "Проблемы и перспективы современной медицины, биологии и экологии" - Том 1 - №4. - Томск - 2010.
Введение. Стимфорте – лекарственный препарат, одобренный для клинического применения в комбинированной терапии вторичных иммунодефицитов, вызванных бактериальными и вирусными инфекциями, включая генитальный герпес и хронический фурункулез. Стимфорте активирует клеточное звено адаптивного иммунитета и врожденный иммунитет через TLR 4. Стимфорте имеет отличный профиль безопасности, что было подтверждено результатами доклинических и клинических исследований.
Цель работы – изучение влияния Стимфорте на иммунологические показатели у мышей при индуцированной иммуносупрессии.
Материалы и методы. Исследования проведены на 80 мышах линии BALB/c. В исследование включены следующие группы (по 10 животных в каждой): 1-я - контрольная (животным водили растворитель препаратов), 2-я - индуцированная иммуносупрессия (иммуносупрессию у мышей вызывали введением циклофосфана в дозе 100 мг/кг внутрибрюшинно веса тела животного в течение 3 сут с интервалом в 24 ч), 3-я - животным на фоне индуцированной циклофосфаном иммуносупрессии вводили Стимфорте в дозе 100 мкг/кг подкожно дважды с интервалом в 48 ч. Мононуклеарные лейкоциты (МЛ) выделяли из селезенок мышей посредством механического размельчения. Клетки-мишени NK-чувствительной опухолевой линии YAK-1 культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением глютамина, 5% эмбриональной телячьей сыворотки и гентамицина при 37оС, в атмосфере 4 % СО2 . В работе использовали иммуномодулятор Стимфорте. Фенотип МЛ исследовали с использованием моноклональных антител (Caltag Laboratories, США) против соответствующих антигенов. Результаты учитывали на проточном цитометре FacsCalibur (Becton Dickinson, США). На активированных киллерных клетках, полученных из мононуклеарных лейкоцитов селезенки мышей при воздействии Стимфорте, исследовались уровни экспрессии молекул CD3, CD4, CD8, CD25, NK. Цитотоксическую активность МЛ определяли на NK-зависимой линии клеток мышиной лимфомы YАС-1 в тесте восстановления 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ-тест). Статистическую обработку данных проводили при использовании t-критерия Стъюдента, используя стандартный пакет статистических программ Windows 98 (StatSoft 5.5).
Основные результаты. Введение мышам циклофосфана в течение 3 сут в дозе 100 мг/кг приводит к иммуносупрессии, проявляющейся уменьшением в 7 раз количества МЛ в селезенках мышей по сравнению с контрольной группой. Популяция МЛ в группе животных, получавших циклофосфан представлена зрелыми лимфоцитами, в то время как в контрольной группе среди МЛ селезенки значительно больше лимфоидных клеток различной степени зрелости (пролимфоитов и лимфобластов). У животных на фоне введения циклофосфана отмечено снижение количества NК-клеток в популяции МЛ и существенное уменьшение их цитотоксической активности (p<0,05 по отношению к контрольной группе). В периферической крови мышей после введения циклофосфана определяются лишь единичные лимфоидные клетки и полиморфноядерные лейкоциты. Введение Стимфорте на фоне индуцированной иммуносупресии повышает более чем в 2 раза содержание МЛ в селезенках мышей, среди которых отмечаются незрелые формы (пролимфоциты). Стимфорте способствует нормализации содержания в популяции МЛ селезенки NК-клеток и повышению их активности почти до исходного уровня (см. табл.). В периферической крови животных рассматриваемой группы также увеличивается содержание зернистых лейкоцитов.
Таблица
Субпопуляционный состав и цитотоксическая
активность спленоцитов мышей в эксперименте
|
Группы
|
Количество мононуклеарных лейкоцитов селезенок мышей, экспрессирующих
поверхностные маркеры, %
|
Цитотоксическая активность, %
|
|
СD3
|
CD4
|
CD8
|
NK1.1
|
CD25
|
Соотношение клеток мишеней/клеток-эффекторов
|
|
1:5
|
1:10
|
|
Контроль
|
45,6±3,5
|
30,2±2,5
|
14,3±0,4
|
18,5±0,3
|
5,4±0,3
|
46,1±6,4
|
54,1±4,1
|
|
Циклофосфан
|
48,3±5,2
|
23,7±3,8
|
17,3±0,5
|
2,3±3,8*
|
6,5±3,4
|
17,2±3,6*
|
25,8±3,2*
|
|
Циклофосфан+Стимфорте
|
42,6±3,2
|
23,3±2,1
|
14,9±0,6
|
12,5±0,4**
|
9,4±0,9
|
53,2±6,1**
|
70,3±1,3**
|
Примечание. * - p<0,05 по отношению к
контрольной группе, ** - p<0,05 по отношению к группе
животных, получавших только циклофосфан.
Таким образом, циклофосфан в исследованном режиме приводит к выраженной иммуносупресиии, проявляющейся в снижении общего количества лимфоцитов в периферической крови и селезенке мышей, а также уменьшением содержания в популяции лимфоцитов NК-клеток по сравнению с интактными особями. Введение Стимфорте на фоне индуцированной цитостатиком иммуносупресиии вызывает достоверное увеличение количества лимфоцитов и нормализует их иммунофенотипические и функциональны свойства.
|
