Пензенский государственный педагогический университет имени В. Г. Белинского

Эта статья опубликована сборнике научных трудов "Проблемы и перспективы современной науки" с материалами Четвертой Международной Телеконференции "Фундаментальные науки и практика" - Том 3 - №1. - Томск - 2011.

  
Продукты пчеловодства являются перспективным источником биологически-активных веществ для биотехнологии и медицины. К настоящему времени из мёда, маточного молочка и гомогената личинок пчел выделено и охарактеризовано большое количество индивидуальных веществ, комбинации которых широко используются для создания бадов и лекарственных препаратов. Совокупность свойств уже охарактеризованных веществ не может объяснить многообразие фармакологических эффектов продуктов пчеловодства в неочищенном виде. Данные исследований последних лет свидетельствуют о достаточно высоком содержании регуляторных пептидов в маточном молочке и гомогенате личинок маток и трутневого расплода пчёл. Однако было охарактеризовано только небольшое количество индивидуальных пептидов. Поскольку биологически активные пептиды влияют практически на все физиологические процессы и регулируют деятельность всех регуляторных систем, перспективным направлением является изучение пептидного спектра пчелопродуктов с целью создания новых лекарственных препаратов на их основе. Изучение содержания уровня того или иного пептида в образце не дает достаточно точных представлений о его биологической роли. Более информативным является изучение процессов синтеза и трансформации регуляторных пептидов, поскольку концентрация биологически активных пептидов зависит от активности ферментов, участвующих в их обмене.
Таким образом, целью нашей работы являлось выделение и изучение свойств биологически-активных пептидов из маточного молочка и гомогената личинок пчёл, а также изучение процессов ферментативного метаболизма регуляторных пептидов на разных этапах онтогенеза личинок пчел.
Регуляторные пептиды выделяли сочетанием методов высаливания, экстракции растворителями, ионно-обменной хроматографии и электрофореза в полиакриламидном геле.
Активность пептидил-дипептидазы А определяли по отщеплению Gly-Arg от карбоксибензоил-Gly-Gly-Arg при рН=8.2, с использованием каптоприла в качестве ингибитора. Активность карбоксипептидазы N определяли по отщеплению Arg от карбоксибензоил-Gly-Arg при рН=7.6, в качестве ингибитора использовали GEMSA. Активность лейцинаминопептидазы определяли флюорометрически по гидролизу лей--нафтиламина при рН 7.4 с использованием пуромицина в качестве ингибитора. Активность карбоксипептидазы Н и PMSF-ингибируемой карбоксипептидазы изучали по гидролизу дансил-фен-лей-арг при рН 5.6, в качестве ингибиров использовали GEMSA и PMSF соответственно.
В результате наших исследований установлена выраженная динамика изменения активности ферментов процессинга и деградации регуляторных пептидов в процессе созревания личинок маток и трутней пчел. Процесс развития личинок сопровождался также заметной динамикой изменения содержания пептидных фракций. Наши результаты свидетельствуют о зависимости развития особи от активности пептидергической системы. Индивидуальные пептиды и их фракции показали выраженный эффект увеличения выносливости белых беспородных крыс в эксперименте по удержанию на плаву с грузом.
Таким образом, наши результаты показывают перспективность дальнейшего изучения регуляторных пептидов пчёл с целью создания новых лекарственных препаратов и биологически-активных добавок на их основе.