ФГУЗ «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт» Рос-потребнадзора (г. Ставрополь)

Эта статья опубликована сборнике научных трудов "Проблемы и перспективы современной науки" с материалами Четвертой Международной Телеконференции "Фундаментальные науки и практика" - Том 3 - №1. - Томск - 2011.

Согласно данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), ежегодно в мире регистрируется полмиллиона новых случаев бруцеллеза. Ha протяжении по-следнего десятилетия в стране регистрируется от 400 до 700 больных в год с впервые диагностированным бруцеллезом. Большинство случаев заболевания было отмечено преимущественно на территориях с развитым овцеводством. В среднем 43,5 - 90% больных выявляются в Северо-Кавказском, Западном и Восточно-Сибирском регио-нах и Поволжье. В течение последнего десятилетия почти в 3 раза увеличился удель-ный вес детей в возрасте до 14 лет в общей заболеваемости впервые диагностирован-ного бруцеллеза, что является показателем напряженности эпидемиологической си-туации по этой инфекции. Периодически регистрируются групповые заболевания лю-дей с числом заболевших 10 и более.
Бруцеллез у человека представляет собой генерализованный инфекционный процесс, характеризующийся бактериемией с последующим обсеменением различных органов и систем, развитием местной воспалительной и общей реакций организма
Основу патогенеза бруцеллеза составляет многогранный ответ иммунокомпе-тентных клеток на действие этиологического агента, заключающийся в кооператив-ном взаимодействии Т- и В- лимфоцитов и их регуляторных субпопуляций, в разви-тии дисбаланса клеточного звена иммунитета,  снижении функциональной активно-сти фагоцитов. Прогноз при бруцеллезе определяется, прежде всего, состоянием именно клеточного иммунитета, так как инфекция часто протекает на фоне достаточ-но высокого уровня циркулирующих антител, которые не обеспечивают защиту мак-роорганизма и не препятствуют формированию бактерионосительства.
 Сложность и многоплановость иммунопатогенеза приводят к полиморфизму и лабильности клинической симптоматики, что обусловливает трудности выбора адек-ватных методов терапии. Традиционные методы лечения бруцеллеза, предусматри-вающие продолжительные повторные курсы антибиотикотерапии, зачастую не обес-печивают полного выздоровления. Проведение длительной антибиотикотерапии за-кономерно ведет к проявлению побочных реакций препарата, усугубляет специфиче-скую сенсибилизацию организма и иммуносупрессию.
Еще одной важной проблемой терапии является быстро развивающаяся рези-стентность бруцелл к антибактериальными препаратам, влекущая за собой трансфор-мацию микробов в L-формы, приводящая к длительному внутриклеточному перси-стированию возбудителя в организме.
В связи с этим остро стоит вопрос о повышении эффективности этиотропной терапии при данной инфекции. Одним из путей, решения данного вопроса может быть использование универсального, безопасного «транспортера» для доставки ле-карственных веществ внутрь клетки. Сегодня такими транспортерами являются липо-сомы, которые, при введении в организм, способствуют преодолению мембранно-клеточных барьеров. Подвергаясь биодеградации компоненты бислойной мембраны липосом активно включаются в метаболические процессы, вызывая определенные изменения в функциональном состоянии организма они влияют на течение заболева-ния, позволяют снизить курсовую дозу используемого препарата и уменьшить крат-ность его введения.
Целью работы явилось изучение влияния ломефлоксацина в свободной и липо-сомальной формах на патоморфологические и бактериологические показатели орга-низма белых мышей при развитии бруцеллезной инфекции.
 Бруцеллезную инфекцию моделировали на рандомбредных белых мышах мас-сой 18-20 г из питомника СтавНИПЧИ при подкожном введении вирулентного штам-ма B.melitensis 565 в дозе 0,5.105 КОЕ в 0,5 мл физиологического раствора. Лечение проводили двумя курсами с интервалом в 10 суток. Ломефлоксацин (Maxaquin, «Searle», Франция) в дозе 1 мг/мышь вводили перорально ежедневно в течение 10 су-ток. Липосомы готовили из фосфатидилхолина, холистериана и дицетилфосфата («Sigma”, США) в молярных соотношениях 7:2:1 методом “выпаривания и обращения фаз”.  Липосомальную форму ломефлоксацина вводили в течение 10 суток через каж-дые 48 часов. В контрольной группе животных лечение не проводили.
Животных, умерщвленных хлороформированием, исследовали через 14 суток после окончания каждого курса лечения, так как на 10-12 сутки после антибиотикоте-рапии в случае сохранения жизнеспособных бруцелл в клетках ретикулоэндотелиаль-ной системы животных происходит выброс микробов в кровяное русло и наблюдается активизация процесса. О степени элиминации бруцелл из организма белых мышей судили по результатам бактериологического исследования, проводимого путем посе-ва гомогенизированных органов умерщвленных животных на агар Альбими pH 7,2. При этом определяли индекс высеваемости и интенсивность обсеменения.  Для гис-тологического исследования от умерщвленных животных брали паховые, аксилярные и подчелюстные лимфатические узлы, кусочки печени, селезенки. Взятые на исследо-вание органы, фиксировали в 10 % нейтральной формалине с последующей провод-кой по спиртам возрастающей концентрации и заключением в парафин. Окраску осуществляли гематоксилин-эозином по общепринятой методике.
В контрольной группе животных наблюдали картину, типичную для острой бруцеллезной инфекции с наличием множественных гранулем, некротизированных в центре в лимфатических узлах и селезенке. В печени очаги фокального некроза, рез-кое полнокровие сосудов и скоплением гистиоцитарных элементов вокруг сосудистой стенки, набухание купферовских клеток.   
По результатам бактериологического исследования у белых мышей, которым вводили свободный ломефлоксацин, после первого курса лечения свободных от ин-фекта животных не было, а после второго курса 47,5 % - 51 особей освободились от возбудителя.
При микроскопическом изучении лимфатических узлов в этой группе белых мышей наблюдали гиперплазию фолликулов, границы которых были нечеткими, еди-ничные гранулемы. В селезенке изменения характеризовались резким увеличением центров фолликулов, наличием гранулем из эпителиоидных клеток. В печени таких животных выявляли нарушение балочного строения, в строме органа единичные гра-нулемы, инфильтрацию купферовскими клетками. Сосуды полнокровны, вокруг сте-нок скопление лимфоидных элементов. После второго курса лечения трабекулы и капсула селезенки оставались отечными, фолликулы гиперплазированными.
При использовании липосомальной формы антибиотика уже после первого курса лечения освобождалось от инфекта 44 % - 47 %  зараженных животных, а после второго курса лечения 82 % - 86 % белых мышей были свободны от возбудителя.
Микроскопически в лимфатических узлах определяли полнокровие сосудов и расширение синусов. Отмечали умеренную гиперплазию ретикулярных клеток и уве-личение размеров фолликулов, границы которых были не четкими. В селезенке на-блюдали не четкую выраженность фолликулов, капсула и трабекулы разволокнены, орган инфильтрирован лимфоцитами. В белой пульпе органа скопление многоядер-ных клеток типа мегакариоцитов. В печени,  данной группы животных,  полнокровие сосудов, дистрофические изменения гепатоцитов и реакция со стороны купферовских клеток. Строма органа инфильтрирована лимфоцитами. После второго курса лечения в лимфатических узлах отдельных животных отмечали незначительную гиперплазию ретикулярных клеток и увеличение размеров фолликулов. В печени умеренные дис-трофические изменения, реакция со стороны купферовских клеток, единичные клетки лимфоидного ряда.
Таким образом, по результатам наших исследований использование ломефлок-сацина в свободной форме способствовало освобождению организма опытных жи-вотных от инфекта после второго курса лечения. При этом в органах выявляли еди-ничные гранулемы без некротизированных центров, отсутствовали фокальные очаги некрозов. Применение липосомального ломефлоксацина препятствовало формирова-нию гранулем в исследуемых органах, отмечали только инфильтрацию стромы орга-нов лимфоидными элементами, при этом большее количество белых мышей были свободны от инфекта.
В результате проведенных исследований установлено, что использование ли-посомальных препаратов характеризуется высокой эффективностью проводимой этиотропной терапии и отсутствием глубоких патоморфологических изменений в ис-следуемых органах и тканях.