Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра инфекционных болезней и эпидемиологии
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (1,4 мб)
Актуальность: Клещевой энцефалит – острое инфекционное (вирусное) трансмиссивное сезонное заболевание с природной очаговостью, вовлечением в процесс нервной системы и возможностью перехода в хроническое течение [1]. Большинство применяемых в настоящее время методов оценки клеточной иммунореактивности, таких, например, как реакция бластной трансформации лимфоцитов, позволяет определить потенциальную функциональную способность лимфоцитов in vitro. Результаты подобных исследований нельзя в полной мере экстраполировать на организменный уровень. Известно, что в нормальном кариотипе человека имеется 10 акроцентрических хромосом, в коротких плечах которых располагаются ядрышковые организаторы. При слиянии отдельных ядрышек в интерфазе ядра образуются ассоциации акроцентрических хромосом, которые можно наблюдать в метафазе митоза. В пролиферирующих лимфоцитах число ассоциирующих акроцентриков снижается до нуля, что обусловлено их разрушением в процессе движения хромосом при митозе.
Цитогенетический метод оценки иммунореактивности лимфоцитов периферической крови, активированных в организме человека, основан на определении в анализируемом образце частоты лимфоцитов без ассоциаций и с двумя ассоциирующими акроцентриками. Их уровень зависит от интенсивности пролиферации лимфоцитов в периферических лимфоидных органах при иммуногенезе и миграции образовавшихся активированных лимфоцитов в организме на момент обследования.
Цель: изучить характер цитогенетических нарушений и уровни интенсивности пролиферации лимфоцитов в периферической крови и в лимфоидных органах при иммуногенезе у больных лихорадочной формой острого клещевого энцефалита.
Материалы и методы: В качестве материала использовалась венозная кровь 5 больных лихорадочной формой острого клещевого энцефалита. Контрольная группа состояла из 5 здоровых лиц, не подвергавшихся ранее укусам клещей, не болевших ранее клещевым энцефалитом и не имевшим в крови специфических антител к этому вирусу. Культивирование лимфоцитов периферической крови, стимулированных митогеном фитогемагглютинином, проводилось по стандартной методике хромосомного анализа [2] в течение 52 часов, что соответствует первому клеточному делению. Известно, что частота ассоциаций акроцентрических хромосом в первом митозе отражает их частоту в интерфазных лимфоцитах, рециркулирующих в крови. Препараты хромосом окрашивали азурII-эозином. У каждого человека анализировали не менее 100 метафаз. Изучение хромосом проводили при увеличении 10?100. Метафазные пластинки с хромосомными нарушениями и с ассоциациями акроцентриков фотографировали при помощи цифровой фотокамеры Pentax Optio W30 с разрешением 7,1 мегапикселей, установленной на тубус светового микроскопа. Полученные цифровые фотографии переносили в компьютер и идентифицировали ассоциации акроцентриков, а также избыточные, недостающие и поврежденные хромосомы. При изучении характера структурных аберраций хромосом учитывали одиночные хроматидные и парные разрывы или фрагменты, а также центрические кольца и дицентрики. Статистический анализ полученных данных был осуществлен с использованием программы Excel с применением t-теста Стьюдента и коэффициента ранговой корреляции Спирмена.
Результаты: Известно, что цитогенетическая стабильность иммунокомпетентных клеток является одним из критериев их функциональной полноценности. В результате изучения характера и уровней хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови у обследованных нами больных клещевым энцефалитом было выявлено статистически существенное увеличение числа клеток со структурными нарушениями, среди которых преобладали хроматидные разрывы (P<0,01). Увеличения числа клеток с транслокационными перестройками хромосом отмечено не было. Кроме того, было установлено достоверное увеличение числа гипоплоидных и гиперплоидных клеток (P<0,05).
В результате оценки уровня ассоциаций акроцентрических хромосом в метафазных пластинках было установлено достоверное снижение, по сравнению с контрольной группой, числа лимфоцитов без ассоциаций и с двумя ассоциирующими акроцентриками, что свидетельствует о существенном подавлении интенсивности пролиферации Т-лимфоцитов в периферических лимфоидных органах при иммуногенезе у больных острым клещевым энцефалитом (P<0,01). В культурах лимфоцитов число клеток без ассоциаций и с двумя ассоциациями акроцентриков отрицательно коррелировало с числом клеток с хроматидными аберрациями хромосом (r= -0,72; P<0,01).
Вывод: Таким образом, у больных лихорадочной формой острого клещевого энцефалита было установлено достоверное увеличение числа лимфоцитов периферической крови с цитогенетическими нарушениями, что может свидетельствовать об их функциональной не полноценности. Кроме того, показано снижение числа клеток без ассоциаций и с двумя ассоциирующими акроцентриками, что может говорить о подавлении интенсивности пролиферации Т-лимфоцитов в периферических лимфоидных органах этих больных, по сравнению со здоровыми людьми.
Список литературы:
1. Иерусалимский, А.П. Клещевой энцефалит / А.П. Иерусалимский. – Новосибирск: Государственная медицинская академия МЗ РФ, 2001.– 317 с.
2. Moorhead, P.S. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood / P.S. Moorhead, P.C. Nowel, W.J. Mellman // Exper. Cell Res. – 1960. – Vol. 20, №2. – P.613-616.
