Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра инфекционных болезней и эпидемиологии
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (1,4 мб)
Актуальность: иксодовый клещевой боррелиоз – инфекционное трансмиссивное природно-очаговое заболевание, имеющее тенденцию к хроническому и рецидивирующему течению, поражающее различные органы и системы.
Известно, что 10 акроцентрических хромосом человека (акроцентрики D- и G-групп) формируют ядрышко после выхода клетки из митоза. При этом нуклеогенез по существу определяется транскрипционной активностью рибосомных генов, локализованных в спутничных нитях в так называемых районах ядрышкового организатора акроцентриков. Активные районы ядрышкового организатора могут быть выявлены при световой микроскопии препаратов интерфазных клеток после обработки раствором нитрата серебра. В основе реакции лежит специфическое связывание ионов металла с нуклеолярными кислыми негистоновыми белками, принимающими участие в транскрипции и процессинге прерибосомной РНК. Таким образом, размер, форма и число ядрышек являются важнейшими показателями уровня пролиферативной активности и функционального состояния клетки. В последние годы, в связи с появлением новых компьютерных технологий, возрос интерес к изучению субпопуляционной и функциональной гетерогенности клеток периферической крови в норме и при различной патологии, в частности при лейкозах. Наиболее часто метод выявления числа аргирофильных районов ядрышкового организатора применяется для оценки пролиферативной активности злокачественных клеток [3]. Вместе с тем, публикаций, посвященных морфометрическому анализу клеток крови при инфекционных заболеваниях крайне мало [1].
Цель: установить особенности реакции бластной трансформации лимфоцитов периферической крови в ответ на митогенную и антигенную стимуляцию у больных с острой безэритемной серопозитивной и хронической субкомпенсированной формами иксодового клещевого боррелиоза с применением стандартного метода окраски и метода выявления районов ядрышкового организатора.
Материал и методы: в качестве материала использовалась венозная кровь 5 больных острой безэритемной серопозитивной формой и 4 больных хронической субкомпенсированной формой иксодового клещевого боррелиоза. Контрольная группа состояла из 5 здоровых лиц, не подвергавшихся ранее укусам клещей, не болевших иксодовым клещевым боррелиозом и не имевшим в крови специфических антител к антигенам боррелий.
Для оценки реакции бластной трансформации лимфоцитов использовался морфологический метод с подсчётом 1000 лимфоцитов. Культуры лимфоцитов были стимулированы митогеном фитогемагглютинином в течение 3 суток или корпускулярным антигеном Borrelia garinii с концентрацией микробных клеток 1,2?106/мл (предоставлен ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ в г. Томске) в течение 5 суток. Поскольку активация образования рибосомной РНК и синтеза белка предшествует появлению морфологических признаков бластной трансформации клеток, то, кроме стандартного метода окраски азуром и эозином, для оценки пролиферативного ответа клеток в культуре нами было использовано выявление фибриллярного центра ядрышка и районов ядрышкового организатора с применением нитрата серебра [2]. Определение площади ядрышкового организатора в ядрах проводилось с помощью анализа цифровых фотографий клеток с использованием программы анализа изображений ImageJ. Известно, что суммарная площадь аргирофильных районов ядрышкового организатора в ядре зависит от транскрипционной активности локализованных в акроцентрических хромосомах генов, кодирующих прерибосомную РНК, и отражает пролиферативную активность клетки. Статистический анализ полученных данных был осуществлен с использованием программы Excel с применением t-теста Стьюдента.
Результаты: стимуляция фитогемагглютинином культур лимфоцитов, полученных от больных острым иксодовым клещевым боррелиозом приводила к существенному повышению числа бласттрансформированных клеток, по сравнению с соответствующими культурами здоровых людей (P<0,01). Фитогемагглютинин-стимулированная реакция бластной трансформации лимфоцитов у больных хроническим иксодовым клещевым боррелиозом была значительно подавлена (P<0,01), по сравнению с группой больных острой формой заболевания. В то же время, значения антиген-стимулированной реакции бластной трансформации лимфоцитов у больных с хроническим течением оказались достоверно выше, чем в группе с острой стадией болезни (P<0,05). Использование окраски на выявление районов ядрышкового организатора уже на 3-тьи сутки культивирования антиген-стимулированных лимфоцитов позволяет выявить достоверное увеличение площади аргирофильных зон. В частности, в эти сроки культивирования у больных острым иксодовым клещевым боррелиозом число клеток с крупными зонами ядрышкового организатора достигает 19?1,2%, в то время как число бласттрансформированных клеток не превышает 2,9?0,4%.
Вывод: таким образом, использование метода окраски районов ядрышкового организатора может быть применено для оценки реакции бластной трансформации лимфоцитов. Результаты, полученные при стимуляции культур фитогемагглютинином могут свидетельствовать о подавлении Т-клеточного иммунного ответа у больных в хронический период иксодового клещевого боррелиоза.
Список литературы:
1. Шилов, Б. В. Компьютерный морфометрический анализ структуры ядер лимфоцитов периферической крови человека в норме и при Эпштейн-Барр вирусной инфекции в условиях in vivo и in vitro : автореф. дис. … канд. мед. наук / Б. В. Шилов. – Томск, 2001. – 16 с.
2. Howell, W. M. Controlled silver staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer : a one step method / W. M. Howell, D. A. Black // Experimentia, – 1980. – Vol. 36, №2. – P. 101-105.
Nuclear organizer regions in lymphomas a quantitative study / H. Yekeler, M. R. Ozercan, A. Z. Yumbul et al. // Pathologica, – 1993. – Vol. 85, № 3. – P. 353-360.
