Изучение процесса запрограммированной клеточной смерти (апоптоза) имеет большое клиническое значение, поскольку с его нарушением связан ряд заболеваний, в частности, и хронические вирусные инфекции [1]. Установлено, что многие вирусы, вмешиваясь в регуляцию внутриклеточного гомеостаза, изменяют соотношение между ростовым и апоптозным потенциалом инфицированных клеток. Между тем клетки с такими нарушениями в норме элиминируются путем апоптоза [3]. Лимфоциты крови, с одной стороны, принимают непосредственное участие в реализации инфекционного процесса, ас другой - являются мишенью для действия персистирующих вирусов, например, возбудителей гепатитов ВиС.
Вышеизложенное послужило основанием для проведения настоящего исследования, целью которого явилась оценка апоптоза лимфоцитов периферической крови при хронических гепатитах В и С с помощью метода проточной лазерной цитометрии [2].
В программу исследования были включены пациенты с хроническими гепатитами ВиС (ХГ-ВиХГ-С). Диагноз устанавливался на основании комплекса клинико-лабораторных показателей, морфологического исследования и подтверждался данными ИФА и ПЦР. Контрольную группу составили 10 здоровых доноров, не предъявляющих на момент обследования жалоб соматического профиля. Клиническим материалом послужила гепаринизированная венозная кровь обследуемых лиц.
Выделенные на градиенте плотности фиколл-верографина лимфоциты культивировали в полной культуральной среде 18 ч. Для оценки стимулированного апоптоза в культуру добавляли фитогемагглютинин (ФГА) («Difco» Германия). После отмывания клетки инкубировали с моноклональными антителами к CD4, меченными фикоэритрином («Caltag», США). Затем клетки суспендировали в буфере, содержащем аннексии V, меченный FITC («Caltag», США). Аннексии связывается с фосфатидилсерином, появляющимся на поверхности мембраны апоптозных клеток. После инкубации клетки подвергали двуцветной цитофлуориметрии на цитометре Epics XL («Beckman Coulter», Франция).
Полученные нами данные свидетельствовали о том, что для больных ХГ-В характерно повышение относительного и абсолютного содержания апоптозных клеток, как в общей популяции лимфоцитов, так и среди CD4+-ioieTOK. При ХГ-С, напротив, отмечалось ингибирование апоптоза лимфоцитов крови. Выявленные тенденции наиболее ярко проявлялись при оценке «активационного апоптоза», которому подвергаются лимфоциты при их стимуляции митогенами, в частности, ФГА. Таким образом, возбудители гепатита, принадлежащие к разным таксономическим классам, вероятно, используют разные механизмы модуляции процесса программируемой клеточной смерти. Поскольку при ХГ-В лимфоциты в ответ на митогенстимуляцию преимущественно переходят в апоптоз, то снижается эффективность специфической иммунной защиты [4]. Стратегия выживания вируса гепатита С направлена на активное блокирование программируемой смерти инфицированных клеток, как защитной реакции организма на инфектоген, что способствует поддержанию хронической персистенции возбудителя.