Апоптоз или запрограммированная клеточная гибель является одним из основных универсальных регуляторных механизмов в биологических процессах [1]. Иммунокомпетентные клетки с одной стороны способны контролировать выраженность апоптоза за счет синтеза ряда цитокинов, с другой стороны апоптоз самих лимфоцитов может служить удобной моделью для изучения этого явления. Наибольший интерес в плане изучения процессов апоптоза представляют барьерные ткани, где отмечается наиболее выраженная антигенная стимуляция и где очевидна практическая значимость апоптоза [2]. Эндометрий играет важную роль в формировании локального иммунитета репродуктивного тракта. Степень активации лимфоидного аппарата эндометрия во многом определяет функционирование эндометрия [2,3]. Поэтому, уточнение тонких механизмов регуляции иммунных процессов в эндометрии позволит расширить наши представления о патогенезе целого ряда заболеваний урогенитального тракта. Изучение особенностей функционирования лимфоидных клеток на различных уровнях в организме будет способствовать более полному пониманию нами механизмов развития и регуляции локального иммунного ответа.
Цель исследования- установить особенности апоптоза лимфоидных клеток эндометрия у здоровых фертильных женщин для уточнения локальных механизмов регуляции и терминации иммунного ответа.
Материалы и методы. Представленная работа была выполнена на базе лаборатории клинической иммунологии НИИ Материнства и детства им. Н. В. Городкова. Материалом для исследования служили гепаринизированная венозная кровь из кубитальной вены и биоптаты эндометрия 23 гинекологически здоровых женщин. Обогащенную популяцию лимфоцитов периферической крови получали стандартным методом скоростного центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографина (d=1,078). Количество Annexin V-связывающих лимфоцитов оценивали в популяции CD45+CD14- клеток. Кроме определения общего количества апоптических лимфоцитов (Annexinv+), определяли содержание лимфоцитов, находящихся на ранних стадиях апоптоза (с фенотипом Annexinv+PI-) и на поздних этапах апоптоза/некроза (с фенотипом Annexin V+PI+). Статистическую обработку данных проводили с расчетом среднего арифметического и ошибки среднего арифметического. Достоверность различий определяли по t-критерию Стьюдента.
Результаты исследования и их обсуждение. Для характеристики особенностей апоптоза в эндометрии здоровых женщин нами была изучена готовность лимфоцитов к вступлению в апоптоз, определяемая по экспрессии на поверхности клеток молекулы CD95. Было установлено, что в эндометрии здоровых женщин достоверно повышалось содержание лимфоцитов, экспрессирующих на своей мембране молекулу CD95+ (p<0,02). В эндометрии здоровых фертильных женщин достоверно понижается количество лимфоцитов, фиксирующих на мембране только аннексии (р<0,05), в то время как количество лимфоцитов фиксирующих и аннексии и пропидиум йодид достоверно не отличается на системном и локальном уровне (p>0,05). Известно, что развитие иммунного ответа сопровождается апоптозом активированных клеток лимфоцитов, что определяет физиологическую терминацию иммунного ответа. Установлена взаимосвязь между нарушениями регуляции процесса апоптоза и развитием онкологических, аутоиммунных и других заболеваний, сопровождаемое снижением эффективности иммунологического надзора [3]. Исследования целого ряда авторов выявили новые механизмы подавления иммунологического надзора, связанные с апоптозом и Fas-антигеном (FasR, APO-1, CD 95) [2]. Основная функция Fas-антигена состоит в связывании с Fas-лигандом (FasL или CD95L), что запускает каскад внутриклеточных реакций, приводящих с апоптозу. Таким образом, взаимодействие FasR с FasL приводит к запуску апоптоза в клетке. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что для эндометрия здоровых женщин характерно более высокое содержание лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности молекулу CD95, по сравнению с этим показателем в периферической крови. Это позволяет сделать вывод о том, что на локальном уровне усилена готовность клеток к вступлению в апоптоз. Однако, повышение количества CD95-позитивных лимфоцитов происходило не за счет регуляторных популяций Т-лимфоцитов. Вероятно, в эндометрии повышена готовность к вступлению в апоптоз других клонов лимфоцитов - например, В-клеток, или ЕК, которые выполняют эффекторную функцию. Складывается впечатление, что высокое содержание в эндометрии активированных CD45RO+ клеток-памяти, которые по литературным данным относятся к популяциям лимфоцитов с более высокой продолжительностью жизни, приводит к более интенсивному темпу смены различных короткоживущих эффекторных популяций после выполнения ими их функции. С другой стороны, отсутствие отличий в экспрессии Fas антигена в популяции Т-хелперов и ЦТЛ, может быть связано с тем, что высокий уровень АГ-стимуляции ведет к высокому темпу смены активированных клонов, в результате чего количество клеток, готовых к вступлению в апоптоз в этих популяциях визуально не определяется. При определении способности клетки связывать Аннексии,  можно идентифицировать все стадии апоптоза.
Дополнительное окрашивание клеток пропидиумом иодидом позволяет определять те клетки, у которых уже нарушена целостность мембраны, то есть клетки, находящиеся либо на поздних стадиях апоптоза, либо -некороза. В нашем исследовании параллельное окрашивание лимфоцитов эндометрия и периферической крови пропидиумом иодидом и Аннексином V позволило определить как общее количество клеток, вступивших в апоптоз, так и содержание лимфоцитов, находящихся на ранних стадиях апоптоза (Аннексии V+/nponHflnyM иодид-) и на поздних стадиях апоптоза/некроза )(Аннексин V+/nponHflnyM иодид+). Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что для эндометрия здоровых женщин было характерно резкое повышение содержания лимфоцитов, находящихся на поздних стадиях апоптоза. Принимая во внимание тот факт, что повышенную готовность к вступлению в апоптоз демонстировали эффекторные популяции лимфоцитов, но не регуляторные клетки, можно предположить, что высокий уровень лимфоцитов, находящихся на поздних стадиях апоптоза, связан именно с быстрой сменой эффекторных клеток в эндометрии. Более высокий уровень АГ стимуляции в эндометрии как в барьерной ткани требует быстрого развития эффекторных стадий иммунного ответа (например, быстрой активации В-лимфоцитов с их трансформацией в плазматические клетки, вырабатывающие иммуноглобулины) для своевременной элиминации патогена. Высокое содержание в эндометрии клеток, подвергнувшихся апоптозу и находящихся на поздних этапах гибели, по-видимому, отражает особенности формирования физиологической терминации иммунного ответа на локальном уровне по сравнению с системным.
Результаты нашей работы позволяют сделать следующие выводы:
1.    В эндометрии здоровых женщин повышено содержание лимфоцитов, готовых к вступлению в апоптоз
2.    В эндометрии здоровых женщин повышено содержание лимфоцитов, находящихся на поздних стадиях
апоптоза.