Научно-исследовательский институт молекулярной биологии Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцово, Новосибирская область, Россия.

Актуальность проблемы описторхоза обусловлена широкой распространенностью этого паразитарного заболевания. В некоторых  эндемичных районах Западной Сибири  до 90% населения инфицировано печеночной трематодой Opisthorchis felineus. Традиционные методы  иммунодиагностики описторхоза имеют ряд существенных недостатков, основными из которых являются низкая специфичность и чувствительность. Причина этого кроется в недостаточной изученности особенностей антигенного состава трематоды и самого заболевания. Наиболее перспективным является разработка иммунодиагностических методов, основанных на детекции специфических антител и антигенов в легкодоступных образцах физиологических жидкостей и выделений человека.
С этой целью было проведено исследования белкового, антигенного и иммуногенного состава O.felineus, что позволили выявить новые иммунологические маркеры этой глистной инвазии. Наиболее значимым из них оказался высокоиммуногенный для человека белок 105 кДа, который является основным компонентом экскреторно-секреторного (Э-С) антигена трематоды. Была получена и охарактеризована уникальная панель из 21 мышиной гибридомной линии, стабильно продуцирующей моноклональные антитела (МКА) к антигенам O.felineus. Все МКА полученные к Э-С антигену O.felineus, как и иммунные сыворотки человека, лучше взаимодействовали в ИФА с Э-С антигеном, чем с соматическим или яичным антигенами. МКА к р105 полипептиду Э-С антигена в иммуноблоттинге имели наибольшую специфичность. Иммунная электронная микроскопия с использованием сывороток инфицированных людей и МКА показала, что основные иммуногены половозрелого O.felineus связаны, в основном, со слизеподобными структурами кишечника, матки и наружной поверхности яиц паразита. Результаты иммунохимического ультраструктурного исследования позволили подтвердить тот факт, что ткани гельминта и его поверхностные структуры вызывают слабый иммунный ответ В-клеточной системы человека, а иммунный ответ в основном формируется на продукты экскреторно-секреторной системы паразита.
Была предложена и апробирована новая модификация непрямого ИФА с применением МКА для выявления специфических IgG иммуноглобулинов. Суть модификации заключается в использовании анти-р105 МКА на начальной стадии ИФА в качестве подложки для захвата р105 антигена, в результате чего происходит аффинная очистка антигена O.felineus и повышается удельная концентрация специфического белка на поверхности твердой фазы. Предложенная модификация увеличила чувствительность и специфичность системы до 92,68% и 97,50%, соответственно. Важно отметить, что  модификация МКА позволила сократить время проведения анализа образцов до 3-5 минут.
На основе подложки анти-р105 МКА разработана новая система сэндвич-ИФА для выявления специфического растворимого антигена O.felineus в физиологических образцах. Эта  система обладала чувствительностью порядка 0,5-1 нг/мл Э-С антигена и была использована для выявления р105 антигена в желчи или кале больных описторхозом людей. Специфичность предложенного метода для образцов желчи составила 93,70% при 92% чувствительности, для образцов фекалий - 85,71% и 71,42%, соответственно. Выявление специфических антигенов имеет несомненные перспективы, поскольку позволяет обнаруживать незначительные количества антигенов паразита в физиологических жидкостях и выделениях. Это позволяет достоверно поставить диагноз без привлечения опытных, квалифицированных паразитологов и микроскопистов. Способ позволяет использовать доступные образцы, требует минимальных объемов исследуемых материалов, отбор которых потенциально не опасен. Иммунодиагностическая система на маркерный антиген паразита перспективна в плане мониторинга результатов лечения описторхоза.
Дальнейшее расширение арсенала иммунодиагностических тестов для диагностики описторхоза и более широкое их практическое использование принципиально важно для борьбы с этой инфекционной  патологией в России. Разработанные методы могут быть с успехом использованы для усиления  эпидемиологического надзора за паразитарными заболеваниями, что позволяет контролировать эпидемиологическую ситуацию на качественно новом уровне.