Известно, что протекающий годами и десятилетиями хронический описторхоз, вызванный Opisthorchis felineus,  приводит к существенным изменениям в иммунном ответе хозяина. Наиболее типичным для описторхоза является супрессия Т-клеточного звена, и повышение числа В-лимфоцитов [4].  Показано, что степень изменений показателей иммунного ответа при данном гельминтозе, как правило, коррелирует с тяжестью течения заболевания [4], однако исследования цитокинового иммунного ответа у больных описторхозом в зависимости от интенсивности инвазии до сих пор не проводилось.
Цель настоящей работы заключалась  в изучении  особенностей цитокинового  иммунного ответа в условиях in vitro  на  специфические  паразитарные антигены, микобактериальный антиген и неспецифические митогены у больных хроническим описторхозом, имевших различную интенсивность инвазии.
Материалы и методы. Проведено обследование 46 больных хроническим описторхозом в стадии обострения (возраст 32,8 ? 10,4 лет). Диагноз был подтвержден копроовоскопически. Интенсивность инвазии определяли по методу Столла [1].  В зависимости от интенсивности инвазии все больные были распределены на две группы. Группу I (21 человек), имевшую низкую интенсивность инвазии (до 1000 яиц/г фекалий), и группу II (25 человек), у которой была выявлена высокая интенсивность инвазии (более 1000 яиц/г фекалий). Контрольная группа включала 23 клинически здоровых лиц, не имевших описторхоз,  а также другие гельминтные инвазии и вирусные гепатиты В или С (возраст 35,1 ? 6,8 лет).  В проведенных нами исследованиях использовался яичный антиген (ЯАГ) и соматический (САГ) описторхов, который получали в соответствии с методом, описанным  А.Т. Котелкиным с соавт. [3].
Для получения культур мононуклеарных клеток использовали  гепаринизированную венозную кровь (20 МЕ/мл). Мононуклеары получали центрифугированием  лейковзвеси на градиенте плотности фиколл-верографина («Pharmacia», Швеция) по методу M. Jondal с соавт. [9]. Клетки отмывали культуральной средой и культивировали в 24-луночных плоскодонных планшетах при температуре 37 ?С и при концентрации СО2 5?. В каждую лунку вносился 1 мл полной культуральной среды RPMI-1640 с добавлением 10? инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, гентамицина 80 мкг/мл, 0,3 мг/мл  L-глутамина, 5 мМ HEPES-буфера), содержащей  около 2?106 клеток/мл. Для стимуляции мононуклеарных клеток использовали специфические антигены описторхов (ЯАГ и САГ) в дозе 20 мкг/мл, микобактериальный антиген (МАГ, очищенный белковый дериват туберкулина, «Sigma», США) в дозе 5 мкг/мл, а также митоген  конконавалин-А (Кон-А, «Sigma», США) в дозе 20 мкг/мл. Уровни продукции интерлейкина-10 (IL-10), интерлейкина-4 (IL-4) и интерферона-? (IFN-?) мононуклеарными клетками оценивали через 72 часа по накоплению этих цитокинов в культуральных супернатантах с помощью твердофазного иммуноферментного метода в соответствии с инструкциями, предлагаемыми производителем тест-систем (ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург).
Различия в уровнях накопления цитокинов в культуральных супернатантах были проанализированы с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни.  Для выявления зависимостей между изучаемыми параметрами проводили ранговую корреляцию Спирмена [2].
Результаты и обсуждение. В ходе проведенного исследования нами было установлено  существенное повышение продукции мононуклеарами IL-4 после стимуляции САГ или ЯАГ у больных описторхозом (p<0,01), имевших различную интенсивность инвазии (группы I и II), по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей (таблица 1). Кроме того, установлено, что уровни продукции IL-4 у больных описторхозом с высокой интенсивностью инвазии (группа II) были достоверно выше, по сравнению с соответствующими уровнями у больных из группы I, имевших относительно низкую интенсивность поражения гельминтами   (p = 0,009 для ЯАГ и p = 0,02 для САГ). Стимулированная с использованием митогена Кон-А продукция IL-4 в культурах мононуклеаров, полученных от больных описторхозом из группы II, была  также существенно выше, чем в контрольной группе (p = 0,006).
Стимуляция культур мононуклеаров специфическими описторхозными антигенами, МАГ или митогеном Кон-А у больных  хроническим описторхозом  (группы I и II) приводила к значительному повышению уровня продукции IL-10, по сравнению с соответствующими уровнями  в супернатантах, полученных от здоровых людей (p < 0,01).  Наиболее высокие уровни продукции IL-10 были определены в стимулированных ЯАГ или САГ культурах мононуклеарных клеток, полученных  от  больных  хроническим описторхозом, имевшим высокую интенсивность инвазии (группы II), по сравнению с соответствующими показателями в группе I  (p = 0,003 для ЯАГ и p = 0,005 для САГ). Сходные достоверные различия были выявлены в уровнях продукции IL-10, стимулированной Кон-А или МАГ, в культурах мононуклеаров, полученных  от больных из групп I и II  (p = 0,005 для Кон-А и p = 0,003 для МАГ).
С другой стороны, уровни продукции IFN-? мононуклеарными клетками, стимулированной специфическими описторхозными антигенами, МАГ или Кон-А у больных описторхозом, имевшим высокую интенсивность инвазии (группа II), были существенно ниже, чем в контрольной группе (p < 0,01). Вместе с тем, уровни продукции IFN-? после стимуляции специфическими описторхозными антигенами, МАГ или Кон-А, в супернатантах  культур, полученных от больных из группы I,  существенно не отличались (p > 0,05) от содержания этого цитокина в культурах, полученных от здоровых людей. Уровни содержания IFN-? в супернатантах культур, стимулированных ЯАГ, САГ, МАГ или Кон-А у больных с высокой интенсивностью инвазии (в группе II), были  достоверно ниже, чем у больных из группы I (p < 0,01).
У больных хроническим описторхозом продукция мононуклеарами IFN-?, стимулированная специфическими описторхозными антигенами, обратно коррелировала с содержанием IL-10 (для ЯАГ r = - 0,57, p <0,001; для САГ  r = - 0,65, p < 0,001 соответственно). Положительные корреляционные связи были  выявлены между уровнями стимулированной описторхозными антигенами продукции IL-10 в супернатантах культур мононуклеаров и интенсивностью инвазии (для ЯАГ r = 0,72 при p < 0,001; для САГ r = 0,68 при p < 0,001).
Механизмы иммунного ответа при гельминтозах до сих пор изучены не достаточно. Экспериментальные исследования на примере модели шистосомозной инвазии показали, что в ранний период заболевания характерно доминирование ответа Тh-1, в то время как при хронизации инфекции начинает преобладать ответ Тh-2 [5]. Эти изменения, по-видимому, опосредованы IL-10-зависимым механизмом [7]. Известно, что IFN-? является маркером ответа Тh-1, а IL-4 рассматривают как один из основных цитокинов ответа Тh-2.  Кроме того, в настоящее время IL-10 считается цитокином с иммуномодулирующими свойствами, способным подавлять активацию Th-1 и Тh-2 [6].
В эксперименте на животных, зараженных другим видом описторхид (Opisthorchis viverrini), было показано, что хроническая стадия инвазии сопровождается значительным повышением продукции  IL-4, IL-5 и IL-10 и одновременным подавлением секреции IFN-?, что также свидетельствовало о доминировании ответа Тh-2 [8]. В настоящей работе в ходе изучения профиля цитокинового ответа у людей, больных хроническим описторхозом, вызванным O.  felineus, нами были получены сходные результаты.  Положительная корреляционная связь между стимулированной продукцией IL-10 мононуклеарами и интенсивностью инвазии прежде была отмечена у больных шистосомозом [11]. По-видимому, повышенные уровни секреции иммуномодулирующего цитокина IL-10 у больных с высокой интенсивностью инвазии могут способствовать ограничению чрезмерного иммунного ответа Тh-2 и развитию связанной с ним патологии [10].