Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2006 год, Том 3, выпуск 4), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника
Для выделения чумного микроба из материала, загрязненного посторонней микрофлорой, применяют накожный метод заражения лабораторных животных (Николаев Н.И., 1968, и др.). Недостатком этого способа являются длительные сроки исследования (7-9 суток). В этой связи нами была предпринята попытка усовершенствования указанного способа с целью сокращения сроков проведения анализа.
Эксперименты проведены следующим образом. В опыт были взяты две группы животных (белые мыши). Первую группу (контроль) заражали по принятой в настоящее время методике - на спине биопробных животных удаляли (эпилировали) шерсть на участке 3-4 см2, протирали обнаженную поверхность кожи влажным тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором, скарифицировали (повреждали поверхностный слой кожи) лезвием скальпеля, наносили исследуемую суспензию и, под прикрытием крышки от чашки Петри или стеклянной воронки, досуха втирали боковой поверхностью скальпеля. В качестве исследуемого материала использовали взвеси вирулентных штаммов чумного микроба в дозе 103-109 м.к./мл в смывах почвы и фуража. Каждой дозой заражали двух белых мышей.
Отличия заражения опытных мышей заключались:
1) перед нанесением исследуемого материала на эпилированный и скарифицированный участок кожи с помощью копья, применяемого в клинической лаборатории для взятия крови из пальца, наносили дополнительные повреждения из расчета 12-16 уколов на 1 см2;
2) исследуемый материал предварительно смешивали с желтком куриного яйца в соотношении 1:0,5 – 1:0,7. При этом мы исходили из того, что дополнительные повреждения кожного покрова, помимо скарификации, в виде множественных накалываний облегчают чумному микробу преодолеть кожный барьер, что должно ускорить развитие инфекционного процесса, а предварительно добавляемый к исследуемой пробе желток куриного яйца предохраняет возбудителя чумы от действия фагоцитов и других факторов естественного иммунитета (Апарин Г.П., 1975).
Опытных и контрольных мышей умерщвляли хлороформированием на 1 и 2 сутки после заражения и вскрывали в соответствии с требованиями противоэпидемического режима. Из трупов извлекали внутренние органы и подвергали их бактериологическому, серологическому и иммунофлуоресцентному исследованиям. Применяли также генетический метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Материал из места заражения исследовали отдельно. Вначале проводили Бактериологические посевы выдерживали в термостате при температуре 28 о С в течение 5 суток.
Проведенные исследования показали, что при бактериологическом исследовании органов чумной микроб был изолирован от животных опытных групп, зараженных в дозе 106-109 м.к./мл, тогда как в контрольных группах животных ни в одном случае возбудитель чумы выделить не удалось.
Таким образом, предлагаемый усовершенствованный способ накожного заражения биопробных животных позволяет из материала, обильно загрязненного сопутствующей микрофлорой, выделить и идентифицировать чумной микроб при его концентрации 106-109 м.к./мл через 2-3 суток от начала исследования.