Сургутский Государственный Университет

Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2006 год, Том 3, выпуск 4), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника

На протяжении длительного времени описторхоз является одной из важнейших экологических, медико-социальных и экономических проблем Ханты-Мансийского автономного округа, поскольку Обь-Иртышский бассейн, особенно Среднее Приобье, признан крупнейшим очагом этой инвазии в мире. В Западно-Сибирском регионе описторхозом поражено до 500 тысяч человек. Инвазированность взрослого населения в некоторых районах очага достигает 80-90% (1,2,3,6,7,8).
    Описторхозная инвазия относится к биотическим факторам среды и является примером гетеротипического взаимодействия между представителями разных видов. Особого внимания заслуживают механизмы компенсаторно-приспособительных реакций, возникающих в паренхиме печени в процессе формирования хозяино-паразитарных отношений. В связи с чем, было интересно провести более глубокий анализ структур гепатоцитов с помощью методов световой и электронной микроскопии.
   Материалы и методы.
    Описторхоз был воспроизведен на сирийских хомяках-самцах.
    В опыте находилось 25 сирийских хомяков самцов. Животные инвазировались в  5-месячном возрасте, что соответствует  половозрелому возрасту. В качестве контроля использовали        интактных животных. Хомяки инвазировались путем введения в глотку 50 жизнеспособных метацеркариев. Забой проводился в одно и тоже время (15 часов). Кусочки печени фиксировали в 10% нейтральном формалине и жидкости Карнуа. Материал для гистоэнзимологических исследований резали в замороженном виде. Изготавливались гистологические срезы толщиной 5-6 микрон. Исследовалась активность ферментов (СДГ, ЛДГ). Для изучения паразита использовали: микроскоп  БИМАМ Р11, микрометр окулярный винтовой МОВ -1 -16х.  Окраска паразита проводилась хлоридом кармина [4,5].

  Широко применялось морфометрическое исследование. Подсчитывалось количество митозов, двухядерных и полиплоидных клеток. Измеряли объём(V) ядра и клетки в одноядерных и двуядерных гепатоцитах. Исследовались ядерно-цитоплазматические отношения в гепатоцитах. Проводилось электронно-микроскопическое изучение   печени с помощью электронного микроскопа JEM- 200 CX при ускоряющем напряжении 80 кВ. Использовалась статистическая обработка результатов исследований с использованием процедур математической статистики, реализованных в пакетах прикладных программ IBM PC БИОСТАТ, а также пакета программ статистического анализа Microsoft Excel, версия 5.0.
   
  Результаты исследований:
 Инвазия 3 суток
Капсула печени гладкая, блестящая, обычного цвета, внешних изменений не выражено. На нижней поверхности печени видны несколько расширенные желчные протоки. На срезе ткань печени полнокровна. Просвет крупных желчных протоков слегка расширен, стенка их незначительно утолщена. Желчный пузырь немного увеличен, заполнен светло- желтой желчью. При его вскрытии и исследовании желчи под микроскопом были выявлены личинки описторхов.
Личинки длиной 0,9 мм, шириной 0,7мм с четко выраженной ротовой и боковой присосками. Паразит активно передвигается.
При микроскопическом исследовании отмечается умеренная гиперемия вен. Стенки артерий – триад несколько набухшие, отмечается периваскулярный отек. Центральные вены расширены, в них определяются эритроциты. Эндотелиальные клетки сосудов набухшие, ядра их вытянуты в радиальном направлении. В отдельных мелких артериях отмечается дезорганизация сосудистой стенки, гибель эндотелия. Рядом лежащие гепатоциты имеют признаки дистрофии, некоторые из них некротизированы. В крупных желчных протоках определяются неполовозрелые личинки описторхов.
В портальных трактах, по ходу артерий, вен, протоков в паренхиме определяются клеточные инфильтраты, состоящие из лимфоцитов, эозинофильных лейкоцитов, гистиоцитов, фибробластов.
Эпителий протоков в прилегающих к паразиту участках разрыхлен и частично слущен. В стенке протоков определяются расширенные лимфатические сосуды. Гепатоциты, с признаками умеренно выраженной белковой дистрофии, полигональной формы. В единичных желчных капиллярах определяется желчь. Пространство Диссе не определяется. Встречаются двуядерные гепатоциты. Синусоидальные клетки набухшие, ядра в них гиперхромные. В зонах клеточных инфильтратов встречаются единичные апоптозные тельца Каунсильмена. Количество митозов 0,2+0,06%. Число двуядерных гепатоцитов 20,2+0,3. Число некротизированных гепатоцитов 25,1+0,46.
                7 сутки инвазии
     На 7-е сутки инвазии паразит локализовался в печени окончательного хозяина. Капсула печени гладкая, блестящая. На нижней поверхности печени видны сероватые, расширенные желчные протоки. При его вскрытии и исследовании желчи под микроскопом были выявлены  личинки описторхов.
Описторхисы длиной 1,5мм, шириной 0,98мм. Четко выражены присоски. Просматриваются  желчеточники, пищевод, ветви кишечника и петли матки.
У половозрелых животных выражены клеточные инфильтраты. В гепатоцитах отмечаются некробиотические и некротические изменения, отмечаются явления зернистой и гидропической дистрофии. Количество гликогена на периферии в печеночных клетках снижается. Активность КФ, по сравнению с контролем (1,4) ,  повышается до 1,8. Активность СДГ снижается – 2,3, по сравнению с контролем – 2,64. Количество митозов 0,4 + 0,13% по отношению к контролю 0,12+ 0,03% - возрастает. Число 2-х ядерных гепатоцитов остается близким 23,24+0,21% по отношению к контролю 23,4+0,31%. Значительно снижаются средние объёмы одноядерных гепатоцитов и их ядер. Ядерно- цитоплазматические отношения уменьшаются в одноядерных гепатоцитах до 1:11 по отношению к контролю 1:28, и в 2-х ядерных гепатоцитах до 1:14 по отношению к контролю 1:18.
              Инвазия 15 сутки
    К 15-м суткам   определяются довольно выраженные подкапсульные желчные протоки. Стенки их утолщены, белесоваты. Просветы желчных протоков содержат мутноватую желчь и ещё  неполовозрелых описторхов, прошедших несколько раз стадию линьки. При вскрытии желчного пузыря и желчных протоков определяются паразиты. Паразиты длиной 4-7 мм и шириной 1-2.5 мм, передний конец тела узкий. А задний заканчивается округло. На узком конце тела располагается чётко выраженная ротовая присоска. Видны желточники, пищевод, ветви кишечника. Так же просматриваются петли матки, заполненные ещё не сформировавшимися яйцами. В рыхлой массе паренхиматозных клеток видны семенники, наиболее светлые, чем у половозрелого описторха.  В печеночной ткани появляются очаги некроза гепатоцитов, паразитарные гранулёмы. Количество гликогена в гепатоцитах уменьшается. Активность СДГ уменьшается до 1,9. Увеличивается активность КФ – 2,6. Возрастает количество митозов до 1,37+0,3%. Количество 2-х ядерных клеток также возрастает – 32,18+6,4%. Средний V ядра в одноядерных гепатоцитах увеличивается до 852,9+536 мк3, а ядра до 39,1+17,8 мк3. В 2-х ядерных гепатоцитах V клетки снижается до 1164+613,9 мк3, а ядра не изменяется по отношению к предыдущему сроку инвазии.
Ядерно- цитоплазматические отношения в одноядерных – 1:21, в 2-х ядерных – 1:12.
               Инвазия 30 сутки.
На 30-е сутки инвазии в печени определяются половозрелые описторхи, продуцирующие яйца. При вскрытии желчного пузыря и желчных протоков определяются  половозрелые описторхисы. Паразиты длиной  6-13 мм, ширина 1¬-3,5 мм. Четко выражены все структуры паразита. 

В паренхиме печени половозрелых животных появляются ложные дольки. Возрастает число гепатоцитов с увеличенными ядрами. Количество некротизированных гепатоцитов несколько уменьшается.
    Содержание гликогена увеличивается. Возрастает активность СДГ до 2,19. Активность КФ уменьшается до 2,1.
    Количество митозов, по отношению к предыдущему сроку, возрастает – 2,4+0,92%. Продолжается рост числа 2-х ядерных гепатоцитов до 29,06+0,25%. Средний обьём (V) одноядерных гепатоцитов продолжает возрастать до 1458+1164 мк3, а их ядер 33,33+18,6 мк3 уменьшается. Средний обьём (V) 2-х ядерных гепатоцитов уменьшается. Ядерно-цитоплазматическое отношение  увеличивается в одноядерных до 1:43 и в 2-х ядерных до 1:31.
    Ультраструктурные   особенности гепатоцитов на 30-е сутки описторхозной инвазии.
 Отмечается уменьшение числа митохондрий, с одновременным увеличением их размеров. Появляются гигантские гантелевидные митохондрии. Митохондриальный матрикс в одних митохондриях уплотнен, в других наблюдается его просветление. Количество крист небольшое, частично лизированы. Отмечается очаговый лизис наружной и внутренней митохондральной мембраны. Все элементы ЦПС расширены. Наблюдается расширение цистерн комплекса Гольджи. Количество гликогена снижено. Наблюдается очаговый цитолиз. Увеличивается количество лизосом, которые перемещаются ближе к ядру. Появляются аутофагосомы.
   Анализ ультраструктурной организации органа показал, что в острой фазе описторхозной инвазии животные зрелого возраста реагируют значительным расширением эндоплазматической сети (ЭПС). Содержание гликогена в цитоплазме повышено.
                                                               Выводы:
  1) Изменения паренхимы печени протекают в виде белковой, жировой и  гидропической дистрофии гепатоцитов, а также некроза печеночных клеток.

2) При исследовании печени в острой фазе описторхоза отмечалось снижение в гепатоцитах гликогена, он расходовался как энергетический материал. Повышалась активность КФ, снижалась активность СДГ. В паренхиме отмечали снижение количества клеток с крупными ядрами.Отмечали увеличение  объёмов одноядерных и двухядерных гепатоцитов.
 
3) Компенсаторно-приспособительные реакции паренхимы печени в ходе формирования хозяино-паразитарных отношений в острую фазу описторхозной инвазии протекают в виде основных форм регенерации, таких как повышение митотической активности, увеличение количества двухядерных клеток и изменением  ядерно-цитоплазматических отношений.
 
4) Ультраструктурные изменения гепатоцитов на 30-е сутки формирования хозяино-паразитарных отношений выявили набухание митохондрий, значительное расширение ЭПС и увеличение содержания гликогена.
 
5) В результате инвазии происходит развитие и созревание гельминта из личиночной стадии до половозрелой формы. К 30-м суткам инвазии в матке паразита и в протоках печени хомяка появляются зрелые яйца описторхиса.

6) В целом, изменения в печени  можно рассматривать как адаптивную реакцию в ответ на описторхозную инвазию.  
                                                              

Список литературы:  
1.    Актуальные вопросы медицинской паразитологии/ Тезисы докл. научн. конф., посвящ. 110-летию со дня рождения академика Е.Н. Павловского./ Воен.-мед.акад. и др.,отв.ред. А.Ф.Никитин. СПБ.: 1994.-64с.  
2.    Беэр С.А., Бочков Ю.А., Бронштейн А.М., и др.; Под ред. В.П. Сергиева, С.А.Беэра. Описторхоз: Теория и практика/ ВНИИ гельминтологии им.К.И.Скрябина и др/М.1989.-200с.
3.    Беэр С.А., Лысенко А.Я. Паразитологический профиль России: один из возможных путей оценки// Региональные проблемы и управление здоровьем населения России (выпуск второй). М.: АЕН РФ.1996.-43с.
4.    Генис Д.Е. Медицинская паразитология.- М.: Медина, 1991.-240с.
5.    Гинецианская  Т.А., Добровольский А.А.  Частная паразитология.-  М.: «Высшая школа», 1978.-304.
6.    Зуевский В.П. Патоморфология печени при описторхозе в зависимости от возраста инвазируемых  животных. Авт.канд.дисс. Тюмень.1985.-18с.
7.    Лысенко А.Я., Беэр С.А. Паразитарные болезни в России (региональный аспект проблемы) // Региональные проблемы здоровья населения России. М.: АЕН РФ.1993.-16с.
8.    Озерецковская Н.Н. Актуальные проблемы описторхоза. Томск, 1986.52-54с.