Учреждение Российской академии наук Петербургский институт ядерной физики им.Б.П. Константинова РАН (г. Гатчина)

Для идентификации и клонирования гена RAD51 из дрожжей Pichia angusta были подобрана пара вырожденных олигонуклеотидов (direct: 5'- agaattc (a/t)g t (g/c)cc (t/c)tc (g/c)gt (a/g)tc (a/t/c/g)at-3' и inverse: 5'- ggaattc (t/a)c(a/t) ga(g/a) (g/c)t(a/t) tt(t/c) gg(a/t/c/g) ga(g/a) tt-3') для амплификации методом ПЦР консервативного фрагмента указанного гена. Пара праймеров была подобраны таким образом, чтобы получить консервативный фрагмент гена RAD51, содержащий кодирующую часть сразу двух доменов, по которым происходит идентификация указанного гена, а именно мотивы Волкера А и В. При этом ожидаемая длина ДНК фрагмента гена Rad51 должна была составить от 120 до 160 пар оснований. Фрагмент гена RAD51 длиной 141 нуклеотид амплифицировали с помощью ПЦР с вырожденными праймерами direct и inverse. Сравнение полученной аминокислотной последовательности, кодируемой этим фрагментом ДНК, с аминокислотной последовательностью белка Rad51 из дрожжей Saccharomyces cerevisiae выявило, что данный фрагмент принадлежит гену, кодирующему белок Rad51 из дрожжей P. angusta (более 80% идентичных аминокислот) [1]. Данные олигонуклеотиды подходят для генотипирования и клонирования с помощью реакции ПЦР и других рекомбинационных генов из различных эукариотических организмов.

Список литературы:
1. Shalguev V.I., Kil Y.V., Yurchenko L.V., Namsaraev E.A., Lanzov V.A.: Rad51 protein from the thermotolerant yeast Pichia angusta as a typical but thermodependent member of the Rad51 family. Eukaryot Cell 2004; 3(6): p.1567-1573.