ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (г. Томск)

Эта работа опубликована в сборнике "Науки  о  человеке":  материалы Х конгресса  молодых  ученых  и  специалистов / Под  ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2009. – 166 с.

Скачать сборник целиком 

Известно, что десять акроцентрических хромосом человека  (акроцентрики D- и G-групп) формируют  ядрышко  после  выхода  клетки  из  митоза.  При  этом  нуклеогенез  по  существу  определяется транскрипционной активностью рибосомных генов, локализованных в спутничных нитях или в районах ядрышкового организатора (ЯОР) акроцентриков. Активные ЯОР могут быть выявлены при световой  микроскопии  препаратов  интерфазных  клеток  после  обработки  раствором  нитрата  серебра.
Размер,  форма  и  число  ядрышек  являются  важнейшими  показателями  уровня  дифференцировки  и функционального состояния клетки. В последние годы, в связи с появлением новых компьютерных технологий, возрос интерес к изучению субпопуляционной и функциональной гетерогенности клеток периферической крови в норме и при различной патологии, в частности при лейкозах. Наиболее часто метод выявления числа аргирофильных ЯОР применяется для оценки пролиферативной активности злокачественных клеток [2]. Вместе с тем, публикаций, посвященных морфометрическому анализу  клеток  крови  при  инфекционных  заболеваниях  крайне мало  [1]. Целью  настоящей  работы  было изучение  с  применением  компьютерного  анализа  состояния  нуклеолярного  аппарата  и  плотности конденсации  хроматина  в  ядрах  лимфоцитов  периферической  крови  у  больных  хроническим  описторхозом.
Мазки  крови  были  получены  от  5  больных  с  копроовоскопически  подтвержденным  диагнозом: 
хронический описторхоз, холангиохолецистит в стадии обострения. В качестве контрольной группы были обследованы 5 здоровых человек. Для выявления аргирофильных ЯОР и ядрышек в ядрах лимфоцитов  был  использован метод,  предложенный W.M. Howell  и D.A. Black  [3]. Кроме  того, мазки крови фиксировали и окрашивали по Романовскому-Гимзе. С помощью цифровой фотокамеры Panasonic DMC-LS70  с  разрешением  7,2  мегапикселей,  установленной  на  тубус  светового  микроскопа, было сделано 96 фотографии мононуклеарных клеток в мазках периферической крови, полученных от больных людей, и 90 изображения этих клеток, полученных от здоровых людей. Для анализа цифровых  изображений  клеток  была  использована  компьютерная  программа  ImageJ.  Статистический анализ полученных данных был осуществлен  с использованием программы Excel  с применением  t-теста Стьюдента и коэффициента ранговой корреляции Спирмена.
У больных описторхозом и у здоровых лиц определяли процентное содержание лимфоцитов, в ядрах которых отсутствовали ядрышки или были выявлены один, два или три и более Ag-позитивных ЯОР. У  больных  хроническим  описторхозом,  по  сравнению  с  контролем,  было  установлено  достоверное  уменьшение  числа  Ag-отрицательных  клеток  (10,63%  против  1,75%,  P<0,05).  Достоверных изменений  в числе нуклеол  в клетке между лимфоцитами больных и  здоровых людей  выявлено не было. Вместе с тем, в лимфоцитах больных описторхозом и в контроле были проанализированы форма и размеры Ag-позитивных ЯОР. В лимфоцитах периферической крови у больных описторхозом, по сравнению с контролем, было установлено значительное увеличение числа крупных гомогенных Ag-позитивных  ЯОР  (90,62%  против  44,4%,  P<0,001)  и  уменьшение  числа  мелких  точечных  Ag-позитивных ЯОР (9,37% против 77,7%, P<0,001). В ходе оценки площади Ag-позитивных ЯОР (площади ядрышка) и площади ядра клетки было установлено прямая корреляционная зависимость между  этими параметрами  (r=0,465, P<0,01). В результате проведенного анализа все изученные изображения мононуклеарных  клеток  крови  были  разделены,  в  зависимости  от площади  ядра  и  с  учетом ядерно-цитоплазматического  соотношения, на  5  условных классов. Проведена  оценка площади Ag-позитивных ЯОР в лимфоцитах всех 5 классов у больных описторхозом и у контрольных лиц. В лимфоцитах, относящихся к классам 1 и 2, у больных описторхозом было установлено наиболее значительное увеличение этого показателя, по сравнению со здоровыми людьми  (P<0,01). Подобные достоверные различия в площади Ag-позитивных ЯОР были установлены в лимфоцитах больных и здоровых  людей,  относящихся  к  классу  3  (P<0,05),  к  классу  4  (P<0,01) и  к классу  5  (P<0,01),  что, повидимому, свидетельствовало о реакции размера ядрышка и увеличения образования Ag-позитивных ЯОР в ответ на антигенную стимуляцию.  

Список литературы:
1.  Шилов, Б. В. Компьютерный морфометрический  анализ  структуры  ядер  лимфоцитов периферической крови человека в норме и при Эпштейн-Барр вирусной инфекции в условиях  in vivo и in vitro : Автореф. дис. … канд. мед. наук / Б. В. Шилов – Томск, 2001. – 16 с.
2.  Nuclear  organizer  regions  in  lymphomas  a  quantitative  study  / H. Yekeler, M.R. Ozercan, A.Z. Yumbul et al // Pathologica. – 1993. – V. 85. – P. 353-360.
3.  Howell, W.M. Controlled silver staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a one step method  / Howell W.M., Black D.A.  // Experientia. – 1980. – V. 36. P. 101-105.