Авторы: Кармалита Е.Г., Новицкий С.В., Нагайцев А.В., Серебров В.Ю.
Сибирский медицинский университет (Томск, Россия)
Эта статья опубликована в сборнике по материалы первой Международной юбилейной конференции «Актуальные проблемы инфектологии и паразитологии» , посвященной 110-летию со дня открытия проф. К.Н.Виноградовым сибирской двуустки у человека (2-5 апреля 2001, г. Томск)
Посмотреть содержание сборника
Скачать сборник целиком
Взаимодействие нуклеиновых кислот и липидов является одной из важнейших проблем современной биохимии, генной инженерии и молекулярной биологии. Разнообразие липидов и их комплексов с нуклеиновыми кислотами как in vivo, так и in vitro определяет сложность проблемы изучения липидов как биоэффекторов.
В связи с этим, важную проблему представляет изучение эффекторных свойств липидов на процессы экспрессии ДНК. Интерес к липидам как к возможным участникам процесса синтеза ДНК возрастает с момента открытия ДНК мембранного комплекса. В настоящее время появляются работы, в которых представлены результаты по изучению не только структурной роли липидов в ДНК мембранном комплексе, но и обсуждается их возможная функциональная роль в составе этого комплекса в репликативном процессе. Отмечается прямая корреляция между синтезом ДНК и синтезом липидов. Процесс репликации ДНК сопровождается не только стимуляцией синтеза фосфолипидов, но и изменением их количественных соотношений. В ядрах регенерирующей печени происходят изменения в содержании отдельных фракций фосфолипидов, которые носят фазовый характер и связаны с прохождением клеток по циклу. Активная форма хроматина содержит значительно больше фосфолипидов (минорных фракций фосфолипидов), чем репрессированная.
Целью работы являлось изучение особенностей течения полимеразной цепной реакции (ПЦР) в присутствии липосом из фосфатидилхолина при разных условиях проведения. Материалом исследования являлась высокополимерная ДНК гепатоцитов, выделенная фенольным методом. Липосомы получали путём экструзии дисперсии фосфолипида и последующей фильтрацией через мембрану. Фосфатидилхолин получали путем экстракции из яичного желтка.
Результаты. В наших опытах мы использовали разные температурные режимы денатурации ДНК во время амплификации (94*С и 80*С соответственно). В эксперименте использовалась нагрузка липосом СаСl2, что снижало скорость протекания ПЦР. Проведенное исследование выявило, повышение скорости ПЦР в 2,2 раза в присутствии липосом из фосфатидилхолина при нормальном температурном режиме (94*С). При 80*С ПЦР не протекает, но добавление липосом в ПЦР при амплификации даёт увеличение скорости ПЦР (на 10% от контроля) даже при температуре денатурации ДНК 80*С.
Заключение. Таким образом, липосомы из фосфатидилхолина яичного желтка увеличивают скорость ПЦР и вероятно участвуют в процессе локальной денатурации ДНК. Известно, что состав липидов связанных с ДНК изменяется при различных патологиях печени. Предложенная модельная система, позволяет исследовать влияния разного состава фосфолипидов на процессы локальной денатурации ДНК и специфичности ДНК липопротеидных комплексов при различных патологиях печени.
|