Одним из перспективных направлений, в том числе и в связи с совершенствованием и внедрением в медицину компьютерных средств анализа структур, является использование количественных критериев для дифференциальной диагностики заболеваний [1]. В полной мере это относится и к заболеваниям печени, так как основные паренхиматозные структуры (гепатоциты, элементы внутриорганного билиарного дерева) и стромальные элементы обладают достаточно высокой специфичностью изменений как при изолированном их изучении, так и при анализе межклеточных коопераций [2, 4, 5]. Работы, посвященные количественной патоморфологии структур печени малочисленны. Основное внимание уделено морфометрической характеристике гепатоцитов при их дисплазии, которую можно рассматривать потенциальным предопухолевым фактором [2, 3, 5, 6]. В качестве критериев диагностики использованы содержание рибонуклеиновой кислоты (РНК) в ядрах гепатоцитов, плоидность, коэффициент эллиптичности ядер как показатель их полиморфизма [3], величина ядерно-цитоплазматического соотношения и ультраструктурные особенности гепатоцитов [3]. В настоящее время установлено, что дисплазия гепатоцитов характеризуется нарушением клеточной регенерации, цито- и гистоархитектоники печеночных долек. Наибольшая связь установлена между развитием дисплазии гепатоцитов и инфицированием вирусом. Цитологические свойства диспластичных гепатоцитов свидетельствуют о причастности дисплазии к предопухолевым изменениям, что делает актуальным разработку морфологических критериев диагностики данных процессов, и имеет важное значение в связи с доказанной в литературе значимой ролью НСV-инфекции в гепатоканцерогенезе.
Цель исследования состояла в проведении цито- кариометрии и отдельном изучении структур печени при хроническом гепатите С (ХГС) у больных с метаболическим синдромом.
Материалы и методы. Цито- и кариометрическое исследование гепатоцитов проведено у 64 больных ХГС с метаболическим синдромом, что существенно дополнило сведения, выявленные при стандартном патогистологическом исследовании. В контрольную группу вошли данные биопсии печени больных ХГС без признаков метаболического синдрома (40 чел.) и аутопсии неизмененной печени (20 чел). При выполнении цито- и кариометрии при ХГС у больных с метаболическим синдромом анализировались только гепатоциты без жировых вакуолей или с пылевидным ожирением. По фактическим результатам кариометрического исследования ядра были подразделены по диаметру на 5 групп (размерных интервалов): менее 6 мкм; от 6,1 до 9 мкм; от 9,1 до 12 мкм; от 12,1 до 15 мкм; более 15 мкм. Кариометрические показатели свидетельствовали, о том, что в гепатоцитах у больных ХГС с метаболическим синдромом достоверно увеличиваются диаметры ядер гепатоцитов, по сравнению с контролем (ХГС и неизмененная печень). В спектре диаметров при ХГС у больных с метаболическим синдром происходит перераспределение за счет 2-3-х кратного увеличения доли ядер с диаметром более 12 и 15 мкм. Данное изменение является одним из признаков дисплазии гепатоцитов. При распределении диаметров ядер гепатоцитов в зависимости от течения, степени клинической манифестации, длительности ХГС у больных с метаболическим синдромом выявлена зависимость между данными характеристиками в изученных случаях.
Результаты. Наши исследования установили увеличение диаметров ядер гепатоцитов при хроническом вирусном гепатите С. Так средний диаметр ядер составил 9,17±0,41 мкм, при 6,62±0,19 мкм в группе контроля - неизмененная печень (p0<0,01). Однако эти изменения были более выражены у больными ХГС с метаболическим синдромом, у которых данный параметр составил 11,4±0,39 мкм (p0<0,01; p1<0,05). Преобладание ядер диаметром 12 мкм и более было характерно для ХГС у больных с метаболическим синдромом (p1<0,05). При этом сдвиги кариометрических показателей гепатоцитов при ХГС у больных с метаболическим синдромом практически идентичны у пациентов различных возрастных групп, что свидетельствует о ведущей роли сочетанной патологии в развитии дисрегенераторных изменений гепатоцитов. Таким образом, анализ кариометрических показателей (средних диаметров ядер и их спектра) свидетельствует о наличии особенностей, характерных для хронического вирусного гепатита С у больных с метаболическим синдром. При вирусной этиологии специфичен сдвиг спектра диаметров в сторону крупных ядер (12 и более мкм), при этом более демонстративные изменения наблюдаются в группе с диаметром ядер 12-15 мкм. Степень сдвига кариометрических показателей достоверно больше у больных ХГС с метаболическим синдромом (44,6%) с выраженной клинической симптоматикой. Интегральные характеристики изменений морфометрических параметров структур дают методы информационного анализа, при которых определяются показатели, не зависящие от особенностей ранжирования групп - количества выделенных морфометрических интервалов. Показатели абсолютной, относительной энтропии и коэффициента избыточности дают целостную характеристику стабильности и пределов возможной изменчивости вариабельной совокупности структур. Проведенный информационный анализ спектра диаметров ядер гепатоцитов подтвердил значимость данного методического приема для интегральной оценки изменений паренхимы печени при хроническом вирусном гепатите С у больных с метаболическим синдромом. Полученные данные свидетельствуют о возрастании информационной энтропии (Н=1,89±0,06), что является интегральным отражением достоверного развития полиморфизма ядер гепатоцитов при ХГС у больных с метаболическим синдромом. Достоверный сдвиг диаметров ядер в сторону укрупнения при общем выраженном полиморфизме у больных ХГС с метаболическим синдромом по сравнению с больными ХГС (Н=1,7±0,07) свидетельствует о более выраженных диспластических изменениях. Определение информационных показателей, таким образом, оказалось еще одним количественным методом, объективизирующим патоморфологические особенности ХГС у больных с метаболическим синдром.
Морфометрические показатели ядер клеток в изолированном виде, как известно, несут только часть информации о структурно-функциональном состоянии клеток в целом. Полную же морфометрическую характеристику, позволяющую представить не только изменения ядерного аппарата, но и его взаимоотношения с цитоплазматическими компонентами, а значит, оценить особенности дифференцировки и биологический потенциал клеточных популяций, дает сопоставительное использование ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО). Данный классический методический прием при применении современного математического информационного анализа оказался высоко информативным для оценки гепатоцитов у больных хроническим вирусным гепатитом С с метаболическим синдромом.
Кроме того, величины ЯЦО и спектр их распределения служат одним из критериев диагностики диспластических изменений гепатоцитов.Подсчет количества двуядерных гепатоцитов в центральных и периферических зонах печеночных долек выявил достоверные отличия их количества в разных зонах. При этом во всех возрастных группах количество двуядерных гепатоцитов преобладало в периферических участках долек в 2-4 раза. Относительное количество (%) двуядерных гепатоцитов распределялось по долькам следующим образом: периферическая зона дольки - 27,4±4,0 (p<0,05), центральная зона дольки - 5,2±1,8 (p<0,05).
В результате определения ЯЦО у больных ХГС с метаболическим синдромом выявлены отличия, свидетельствующие о существенных изменениях ядерного аппарата гепатоцитов. При ХГС средняя величина ЯЦО составила 0,60±0,02 достоверно (р<0,05) выше, чем в группе контроля (0,21±0,03), и достоверно (р<0,05) меньше, чем у больных ХГС с метаболическим синдромом (0,73±0,02). Наибольшие как абсолютные, так и относительные средние величины информационной энтропии оказались в группе ХГС с метаболическим синдромом. Двукратное преобладание двуядерных гепатоцитов при ХГС у больных с метаболическим синдромом также является одним из признаков диспластической перестройки паренхимы печени у больных сочетанной патологии.