Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Современный мир, природа и человек», Т.2, №1, с материалами Пятой, Юбилейной Телеконференции, посвященной 120-летию открытия описторхоза у человека профессором медицинского факультета Томского университета К.Н. Виноградовым (6-11 июня 2011 года, г. Томск).

Скачать сборник целиком

Скачать информацию о сборнике (титульный лист, обложку, оглавление, список авторов)

Актуальность изучения тучных клеток объясняется их участием в комплексе межклеточных взаимодействий [1; 2]. Получение такой информации представляет не только теоретический интерес, но может служить ряду практических целей. Так как многие функции лаброцитов исследованы недостаточно [1; 3], то уточнение особенностей их поведения следует отнести к приоритетным задачам. Однако в культурах перитонеальных клеток, часто используемых для изучения особенностей реагирования лаброцитов, наблюдается незначительное (около 1-2%) содержание последних, что затрудняет проведение анализа и сказывается на достоверности результатов исследования. Поэтому разработка методов инкубации тучных клеток, направленная на повышение их концентрации в культуре является целесообразной.
Для создания фидерного слоя (с целью увеличения численности адгезированных тучных клеток на единицу площади подложки) использовали: 1. смешанные культуры перитонеальных клеток (содержащих лаброциты) и лимфоцитов селезенки; 2. смешанные культуры перитонеальных клеток и лейкоцитов крови; 3. культуры с увеличенной в 2 и в 4 раза концентрацией посадки перитонеальных клеток. Концентрация посадки лимфоцитов селезенки и лейкоцитов крови в смешанных культурах соответствовала концентрации перитонеальных клеток. Культуры клеток, выделенных от мышей линии BALB/c, инкубировали в течение 3 часов. Контролем служили культуры перитонеальных клеток с концентрацией посадки 1000 тыс. клеток в 1 мл взвеси.
Согласно результатам исследования наиболее оптимальным подходом, позволяющим увеличить численность адгезированных тучных клеток на единицу площади подложки в 10,6 раза, следует считать метод двукратного увеличения концентрации посадки перитонеальных клеток, при котором создаются адекватные условия инкубации лаброцитов. Об этом свидетельствует отсутствие достоверного возрастания количества дегранулирующих клеток. Данный метод также наименее сложен в техническом отношении. Следует указать, что при увеличении концентрации посадки перитонеальных клеток в 4 раза не наблюдается увеличения частоты встречаемости тучных клеток по сравнению с вышеотмеченным методом. При использовании лейкоцитов крови и лимфоцитов селезенки для создания смешанных с перитонеальными клетками культур отмечали возрастание численности тучных клеток в 2,1 и в 2,7 раза, соответственно. Эти способы не имеют особых преимуществ по сравнению с методом двукратного увеличения концентрации посадки перитонеальных клеток, кроме того они являются достаточно трудоемкими и требуют дополнительных затрат времени на свое осуществление.
Таким образом, наиболее оптимальным методом, позволяющим многократно увеличить количество адгезированных тучных клеток на единицу площадь подложки, следует признать способ двукратного повышения концентрации посадки перитонеальных клеток. Показательно, что возрастание концентрации посадки не приводит к увеличению относительной численности тучных клеток (от числа всех перитонеальных), влечет увеличение их абсолютного количества пропорционально их концентрации во взвеси, и вызывает не пропорциональное многократное возрастание числа лаброцитов на единицу площади подложки. Это можно объяснить адекватной адгезией лаброцитов к фидеру из перитонеальных клеток. Метод может использоваться при проведении экспериментов, целью которых является изучение различных аспектов поведения тучных клеток.

Список литературы:
1. Ильин Д.А., Архипов С.А Сравнительная оценка функциональной и интегративной активности макрофагов и лаброцитов в генотипически различных культурах перитонеальных клеток // VII всероссийская конференция по патологии клетки. Москва, 2005. - С. 56 – 57.
2. Kovanen PT. Mast cell granule-mediated uptake of low density lipoproteins by macrophages: a novel carrier mechanism leading to the formation of foam cells // Ann Med. – 1991 –V. 23. – № 5. P. 551 – 559.
3. Metcalfe D.D., Baram D., Mekori Y.A. Mast cells // Physiol. Rev. – 1997. – V. 77. – № 4. – P. 1033 – 1079.