Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии» (2004 год, выпуск 1), под редакцией проф., д.м.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника

Морфология, физиология и гистогенез форменных элементов крови костистых рыб представляет значительный интерес  для эволюционной гистологии тканей внутренней среды [2]. Это обусловлено двумя основными причинами: во-первых, чрезвычайно гетерогенным гистоморфологическим и гистофизиологическим составом крови у очень  филогенетически близких видов [1,2,3,7,8,10],  а во-вторых, в связи с предполагаемым полифилическим происхождением представителей класса костистых рыб. Кроме того, в следствие бурного эволюционного развития эта группа животных является чрезвычайно удобной для изучения закономерностей  филогенеза тканей.
Исследование гистологии крови рыб имеет не только теоретическое, но и некоторое практическое значение, в связи с использованием их для целей экспериментальной  онкологии [5], поскольку они могут найти применение для индикации лейкемогенных веществ во внешней среде и для изучения индуцированных лейкозов.
В связи с этим нами было произведено исследование форменных элементов крови широко распространенного, но мало изученного в этом отношении вида (Leucaspius delineatus, сем. карповые), который кроме того, из-за некоторых особенностей (неприхотливость, широкое распространение и т.д.) является хорошим объектом для онкологических целей.
Материал и методика.
    Материалом  для работы послужили 200 особей вида L.delineatus, отловленные в стоячих водоемах в различное время года. Животных забивали путем отсечения головы без предварительного наркотизирования. Из полученной при декапитации крови, изготовлялись мазки на предметных и покровных стеклах. Препараты  фиксировали 96%  этиловым спиртом  и парах 12% формалина. Для окраски использовали методы Романовского – Гимзе, гематоксилином – эозином, эритрозин – метиленовым синим, ставились гистохимические реакции на ДНК по Фельгену, на оксидазу по Гиршельду, на гликоген по Лангасу, на жир суданом Ш.
    Для изучения кроветворения исследовались окрашенные мазки различных органов с целью обнаружения кроветворных элементов.
    С целью изучения биологических свойств лейкоцитов (способности к миграции и фагоцитозу) были поставлены опыты с воспроизведением экспериментального воспаления.
    При помощи  пастеровской пипетки в полость тела вводились 0,05 мл. мясо – пептонного бульона, вызывающего раздражение целомической выстилки и массовый выход  лейкоцитов из сосудов. Через 1 час после введения бульона впрыскивали 0.1 мл. 500 – миллиардной взвеси 2- суточной агаровой культуры B.cereus . Спустя различные промежутки времени экссудат извлекали пипеткой Пастера, изготовляли мазки, фиксировали спиртом и окрашивали эритрозин – метиленовым синим.
Результаты и обсуждение.
                                             Морфология элементов крови.
    В сосудистой крови данной рыбы выявлены следующие клеточные формы:
1.    Эритроциты. Имеют овальную форму, круглое гиперхромное  ядро и широкую оксифильную  гемоглобинизированную цитоплазму. Из цитохимических реакций лишь реакцией Фельгена обнаружено наличие ДНК (в ядре), остальные реации были отрицательными.
2.    Тромбоциты. Эти клетки, приблизительно равные по размерам лимфоцитам, имеют ядро и бесструктурную цитоплазму, плохо сохраняются на мазках.
3.    Лейкоциты крови представлены двумя типами (см. таблицу):
4.    а) Агронулоциты. Морфологически представлены как  лимфоидными, так и моноцитоидными формами, четких различий между которыми нам обнаружить  не удалось. Они имеют круглое, хорошо окрашивающееся по Фельгену ядро, и более  или менее широкую базофильную цитоплазму, лишенную постоянной специфической зернистости. Изредка в цитоплазме встречаются гранулы гликогена и суданофильные  липоидные капли. Реакция на оксидазу оказалась отрицательная. Размеры этих клеток 7-10 мк., среди лейкоцитов они составляют 75 – 90% (в среднем 85%).
     б) Гранулоциты. Гранулоциты крови верховок имеют характерные особенности. Это небольшого (6-9 мк) размера, содержащиеся  в крови  в относительно малом количестве (10-25%) клетки, имеют одно некрупное круглое ядро, иногда снабженное перетяжкой и слегка базофильную цитоплазму, снабженную мелкой амфофильной зернистостью. Реакция на гликоген, на оксидазу положительная (в виде мелких зерен, иногда не определяется). В цитоплазме имеются мелкие капли жира.
Таблица. Морфологическая и цитохимическая характеристика лейкоцитов крови верховок (L.delineatus).


Кроветворение.
    Нами найдено, что у верховок кроветворение, как лимфоидное, так и миелоидное и эритроидное  происходит в селезенке. На окрашенных препаратах можно наблюдать все стадии от морфологически сходных с так называемыми большими лимфоцитами клеток до дифференцированных лейкоцитов, эритроцитов и т.д.
    Несмотря на наличие в литературе указаний на entestinum как основное место локализации лейкоза, обнаружить кроветворные элементов в стенки кишечника нам не удалось.
    Хотя хорошо известно наличие у рыб зачаточного тимуса, у исследованного нами вида вилочковая железа была настолько мелка и неразвита, что исследовать ее не удалось. Почечное кроветворение  у L. delineatus  выражено слабо.
    Таким образом, по – видимому основным местом  миело – эритро- и тромбопоэза является селезенка.
    В других органах очагов кроветворения и кроветворных клеток не обнаружено.
Участие клеточных элементов в воспалении.
    В первые часы после введения в полость тела культуры бактерий наблюдалась усиленная миграция клеток крови из сосудов. Способность к миграции проявляют все типы лейкоцитов.
    Первично в экссудате обнаруживаются почти исключительно лейкоциты с амфофильной зернистостью. Этот тип лейкоцитов проявляет интенсивную способность к фагоцитозу. В цитоплазме амфофильных лейкоцитов  можно обнаружить захваченных бацилл и их споры. Число фагоцитированных  объектов может достигать нескольких десятков. При небольшом числе частиц вакуоли (фагосомы) некрупных размеров и клетка имеет перстневидную форму. Если число бактерий в лейкоците значительно, то клетка сильно раздувается образовавшейся вакуолью до гиганских размеров, во много превышая размеры лейкоцита, не содержащего фагоцитированных частиц. Ядро клетки оттесняется  к периферии, цитоплазма образует тонкий слой над фагосомой и клетка принимает форму шара, заполненного бациллами. Что касается бактерий,то они находятся на разных стадиях распада, фагоцитоз носит завершенный характер. Благодаря этому инфекционный процесс купируется на 2-й день после инъекции культуры бактерий.
    Учитывая эти биологические особенности амфофильных лейкоцитов можно сделать вывод об их тождестве со специальными лейкоцитами Максимова.
    Несколько позже, чем амфофилы, начинают мигрировать лимфоидные клетки. В очаге воспаления они скапливаются в значительном количестве. Соединяясь, агранулоциты образуют многоядерные гигантские клетки. Гигантские клетки бактерий не фагоцитируют. Согласно литературным данным, морфологически сходные  клеточные элементы образуются  при введении в полость тела рыб инородных  объектов [9].
Выводы:
1.    В состав крови верховок (L.delineatus) имеются эритроциты, тромбоциты и два вида лейкоцитов. По классификации Хейсиной [8] этот вид относится к 3-ей группе.
2.    По биологическим свойствам амфофильные  лейкоциты относятся к типу, названному А.Максимовым специальными лейкоцитами.
3.    Кроветворение у L.delineatus  происходит  главным образом в селезенке.