Авторы: Малахова А.Ю.¹, Трусов С.Н.¹, Севбо Д. П.¹, Михайлицын Ф.С.², Бурякина А.В.¹

¹Санкт-Петербургская  государственная химико-фармацевтическая академия (Санкт-Петербург)

²ИМПиТМ им. Е. И. Марциновского ММА  им. И. М. Сеченова (Москва)

               По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) из 50 млн. человек, ежегодно умирающих в мире, более чем у 16 млн. причиной смерти являются инфекционные и паразитарные заболевания. Этот класс болезней остается ведущим среди причин смертей человечества в настоящее время. Однако, по данным ВОЗ, общее число заболеваний и смертей от кишечных гельминтозов выше, чем от бактериальных, вирусных инфекций и других паразитарных болезней, вместе взятых.  По числу больных в мире заражения кишечными гельминтозами занимают третье место [А.Я. Лысенко, М.Г.Владимова,2002].

Паразитарные болезни являются причиной задержки психического и физического развития детей, снижают трудоспособность взрослого населения. Вызывая аллергизацию организма пораженного человека, они снижают сопротивляемость к инфекционным и соматическим заболеваниям, уменьшают эффективность вакцинопрофилактики, также являются одной из причин  возникновения онкологических заболевании. По оценке Всемирного банка экономический ущерб от кишечных гельминтозов занимает четвертое место среди болезней и травм [А.Я. Лысенко, М.Г.Владимова,2002].

Длительное использование для лечения людей и животных  одних и тех же антигельминтиков постепенно привело к распространению резистентных популяций паразитов [В.В. Саушкин, 2001; Ю.В. Тимохина, 2002]. 

В настоящее время, на фармацевтическом рынке представлены в основном импортные средства для борьбы с гельминтозами человека и животных. В связи с этим на кафедре фармацевтической химии в течение ряда лет ведется поиск новых эффективных и малотоксичных антигельминтных средств в ряду салициланилидов. В нашей стране применяются  при цестодозах крупного рогатого скота и овец  фенасал в дозе 100 мг/кг, но в настоящее время его мало производят в связи со сложностями синтеза. По аналогии с фенасалом  на кафедре ранее были синтезированы соединения МСТ-21, МСТ-22 и  ронтанокс [Ф. С. Михайлицын, Г. А. Гицу Г.А.,2010].  Общей стадией получения веществ является амидирование 3,5-дигалогенсалициловой кислоты. Мы использовали два метода, первый с применением хлорида фосфора (III). Второй с образование активированного эфира (при взаимодействии кислоты с хлористым тионилом), а затем он реагировал с амином. По химической структуре МСТ-21 представляет собой N-(2-хлор-4-нитрофенил)-2-гидрокси-3,5-дибромбензамид, а МСТ-22 его дихлораналог. Полученные соединения  были переданы для изучения противогименолепидозной активности в  ИМП и ТМ им. Марциновского (г. Москва), соединения использовали в микронизированном  виде с величиной частиц 10-15 мкм (получено методом размола). Опыты проводили на экспериментальной модели гименолепидоза (белые мыши, экспериментально инвазированные Hymenolepis nana в дозе 200 инвазированных яиц на животное). На каждую испытываемую дозу веществ  использовали по 8 мышей, вводили в крахмальном клейстере перорально, однократно на 13 день после заражения [Р.У. Хабриев, 2005]. Результаты опыта учитывали через сутки после лечения по числу животных, полностью освободившихся от инвазии. Соединение МСТ-22 активнее  МСТ-21 в 1,2 раза, при этом эффективность последнего не уступает эффективности фенасала. Ронтанокс по химической структуре является (N-[4-метил-3-хлорфенил]-2-гидрокси-3,5-дибромбензамид). Основные  преимущества его простота синтеза и широкий спектр антигельминтного действия, поскольку это вещество при опытной дегельминтизации продуктивных сельскохозяйственных животных  оказалось эффективно не только при мониезиозе (цестодозе) овец, но при фасциолезе (трематодозе) крупного рогатого скота, а также обладает выраженным действием при нематодирозе, что являлось основание для выдачи патента [С.Н. Трусов, Ф.С. Михайлицын, 2007; Д. П. Севбо, Е.И. Саканян, 2009] . Это свидетельствует, что поиск эффективных препаратов в ряду салициланилидов далеко не исчерпан.  Наша работа развивалась в направлении снижения токсичности салициланилидов, при сохранении достаточно высокой активности. Определение острой токсичности (расчет однократной полулетальной дозы — ЛД₅₀) синтезируемых соединений проводили на мышах по экспресс-методу Прозоровского в лаборатории фармакологических исследований СПХФА под руководством Бурякиной А. В.. Исследовали  вещества в широком диапазоне доз: при пероральном введении диапазон доз составлял от 500 до 5010 мг/кг; при внутрибрюшинном — от  100 до 1580 мг/кг.  При выборе доз ориентировались на растворимость вещества и максимальный объем жидкости, допустимый при пероральном и внутрибрюшинном введении мышам. При пероральном  введении суспензии соединения в 1% растворе крахмала в дозах от 501 до 5010 мг/кг гибели и симптомов отравления среди животных не отмечали. Дозу препаратов, превышающую 5010 мг/кг, животным ввести не удалось из-за ограничения растворимости веществ  в крахмальной слизи и предельно допустимых объемов жидкости для внутрижелудочного введения мышам. Последнее обстоятельство не позволило рассчитать ЛД₅₀, которая заведомо превышает 2500 мг/кг для субстанции, растворенной в оливковом масле, и 5010 мг/кг для субстанции, растворенной в 1% слизи.  Сравнительную токсичность препаратов удалось получить только при внутрибрюшинном введении в 1% крахмальной слизи [А.В. Бурякина,    Ф. С. Михайлицын, 2011]. Мы полагали, что этого можно было бы достичь заменой метильных групп, на метокси группу. В результате оказалось, что активность метоксиронтанокса  в 1,5 раза выше, чем у фенасала, а токсичность в 1,5 раза ниже, чем у ронтанокса [Д. П. Севбо, С.Н. Трусов, 2010].

       Второй путь снижения токсичности могло бы оказаться ацилирование фенольного гидроксила в молекуле салициловой кислоты. Эта работа велась совместно с профессором Михайлицыным Ф. С., он  предоставил образец полученного вещества. Чистоту этого образца мы изучили с помощью ТСХ в разных системах, при этом оказалось, что помимо основного продукта содержалось до 20% побочного вещества. Примесью оказалась 2-ацетокси-3,5-дибромбензойная  кислота, для того, чтобы избежать её  образования, мы вместо полярного ацетона использовали - бензол,  как ацилирующий  агент был взят - хлористый ацетил, а в качестве акцептора хлористоводородной кислоты – пиридин.  Мы получили чистый ацетилронтанокс,  который в 7 раз менее токсичен, чем ронтанокс, но сохранил высокую степень активности при цестодозах, чем у фенасала [Ф.С. Михайлицын, С.Н. Трусов, 2009; Ф.С. Михайлицын, Д. П. Севбо, 2010]. Параллельно синтезировали МСТ-04, которое по химической структуре является N-(4-метилфенил)-2-ацетилокси-3,5-дибромбензамид. Его эффективность по сравнению с фенасалом увеличилась в 1,5 раза. Затем  дихлорацетилронтанокс   оказался в 9 раз менее токсичным, чем ронтанокс, но вместе с тем сохраняет более высокую степень активность при цестодозах, чем  аналогичная ацетилдибромпроизводное [Ф.С. Михайлицын, Д. П. Севбо, 2010]. Параллельно синтезировали МСТ-04, которое по химической структуре является N-(4-метилфенил)-2-ацетилокси-3,5-дибромбензамид. Его эффективность по сравнению с фенасалом увеличилась в 1,5 раза.

Основные результаты нашей работы:

1.Аналоги ронтанокса оказались эффективнее  аналогов фенасала.

2. Изменение методики получения ацетокси производных (вместо ацетона - бензол, вместо уксусного ангидрида -  хлористый ацетил) позволило избежать образования 2-ацетокси-3,5-дигалоген бензойной кислоты.

3. Замена метильной группы ронтанокса  на метокси группу снизило токсичность в 1,5 раза, при этом активность была в 1,5 больше чем у фенасала.

4. Ацилирование фенольного гидроксила снижает токсичность в дибромпроизводном ронтанокса в 7 раз, а в дихлорпроизподном в 9 раз.

5. Замена атомов брома на атомы хлора в ацетоксипроизодных повышает пртивоцестодозную активность в 1,2 раза.

Литература.

 1.Антигельминтное средство на основе N-(3-хлор-4- метилфенил) -3,5- дибромсалициламида: патент РФ2370484: Зарегистрирован в Государственный Реестр Изобретений  РФ 20.10.2009г./ Д.П.Севбо, Е.И. Саканян, С.Н. Трусов.

2.Бурякина, А.В. Острая токсичность ронтанокса, обладающего антигельминтной активностью / А.В. Бурякина, Ф.С. Михайлицын,    Д.П. Севбо, А.Ю. Малахова, С.Н. Трусов // Российский паразитологический журнал. – 2011. - № 1.- С. 108-111.

3. Лысенко А.Я., Владимова М.Г., Кондрашин А.В., Майори Дж Клиническая паразитология.  / Дж. Д. Вильямс // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. — 2002. —752с.

4.Михайлицын, Ф.С. Оценка противогименолепидозной активности соединения МСТ-04 / Ф.С. Михайлицын, С.Н. Трусов,  Д.П. Севбо, Г.А. Гицу, А.Ю. Малахова// Медицинская паразитология и паразитарные болезни. – 2009. - № 3.- С. 40.

5.Михайлицын, Ф.С. Оценка противогименолепидозной активности соединения МСТ-03 / Ф.С. Михайлицын, С.Н. Трусов,  Д.П. Севбо, Г.А. Гицу, А.Ю. Малахова// Медицинская паразитология и паразитарные болезни. – 2009. - № 4.- С. 60.

 6.Михайлицын, Ф.С. Противогименолепидозная активность соединения МСТ-02 / Ф.С. Михайлицын, Д.П. Севбо,  С.Н. Трусов,  Г.А. Гицу, А.Ю. Малахова // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. – 2010. - № 1.- С. 47-48.

7. Михайлицын, Ф.С. Соединение МСТ-21и его противогименолепидозная активность / Ф.С. Михайлицын, Г.А. Гицу,  Д.П. Севбо,  С.Н. Трусов, Л.А. Болотина // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. – 2010. - № 4.- С. 49-50.

8.Трусов, С.Н. Спектр антигельминтной активности ронтанокса / С.Н. Трусов, Ф.С. Михайлицын, Д.П. Севбо, И.А. Архипов, А.В. Радионова, Н.И. Кошеваров // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. – 2007. - № 4.- С. 50-51.

9. Тимохина Ю.В. Эффективность нового антгельминтного препарата триантелм // Мат. X Московского междунар. вет. конгр. М., 2002. - С. 270-274.
10. Саушкин В.В. Комплексный антипаразитарный препарат, не обладающий иммуносупрессией // Мат. науч. конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями". М., 2001. - С. 246-247.

11.Севбо, Д.П. Получение и изучение противогименолепидозной активности соединения МСТ-13 / Д.П. Севбо, С.Н. Трусов, А.Ю. Малахова, Г.А. Гицу, Ф.С. Михайлицын,  // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. – 2010. - № 4.- С. 45.

 12.Хабриев Р.У.(ред.). Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005. — С. 626 – 628.