Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра патофизиологии

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 68-й научной итоговой студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 20-22 апреля, 2009 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,5 мб)

 

На сегодняшний день инфекционные заболевания, вызываемые вирусами семейства герпеса, являются одними из наиболее распространенных инфекций в мире и представляют огромную опасность для здоровья населения. Число госпитализированных больных  от него ежегодно составляет более 2,5 млн. человек [3].
В иммунопатогенезе герпесвирусной инфекции немаловажным является ослабление резистентности макроорганизма на фоне депрессии Т-клеточного иммунитета. Характер течения, частоту и интенсивность рецидивов герпесвирусной инфекции в значительной степени определяет состояние клеточного иммунитета, опосредованного Т-лимфоцитами. Один из важнейших механизмов, посредством которого Т-лимфоциты участвуют в защите от герпесвирусной инфекции, связан с продукцией этими клетками иммунорегуляторных цитокинов, в частности интерлейкина-2(ИЛ)-2 [1,2].ИЛ-2  играет ключевую роль в иммунопатогенезе герпесвирусной инфекции. Секретируемый преимущественно Тh1-лимфоцитами ИЛ-2 обеспечивает в организме высокую активность «вспомогательных» клеток и эффекторных цитотоксических Т-лимфоцитов, поддерживая тем самым клеточный иммунный ответ. Имеются сведения, что аллельный вариант Т-330G промотора гена предположительно ассоциирован с уровнем продукции ИЛ-2 [2].
 В связи с этим целью настоящего исследования было изучение распространенности полиморфного участка T-330G промоторного участка гена ИЛ-2 среди больных герпесвирусной инфекцией, проживающих на территории г. Томска и Томской области, и оценка степени ассоциированности генетического полиморфизма с уровнем продукции соответствующего цитокина.
В программу исследования вошли 80 пациентов (32 мужчины и 48 женщин в возрасте от 18 до 50 лет) с хронической герпесвирусной инфекцией, проживающих на территории Томска и Томской области. В  контрольную группу были включены 82 практически здоровых донора с аналогичными характеристиками по полу и возрасту.
Материалом исследования служила стабилизированная венозная  кровь, взятая утром натощак. Концентрацию ИЛ-2 в супернатантах оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с инструкцией, прилагаемой производителем тест-систем («Cytimmune», США). Оптическую плотность растворов регистрировали на микропланшетном фотометре «Multiskan EX» («ThermoLabSystems», Финляндия).
Выделение ДНК из периферической крови проводили сорбентным методом согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфного участка T-330G гена ИЛ-2 осуществляли с использованием рестрикционного анализа продуктов амплификации специфических участков генома согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия), с применением специфических праймеров. В дальнейшем продукты амплификации гена ИЛ-2 подвергали действию рестриктазы BfaI. Продукты рестрикции разделяли в 8% полиакриламидном  геле.
Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по U-критерию Манна-Уитни. Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с герпесвирусной инфекцией сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах больных и здоровых индивидов, используя критерий ?2 с поправкой Йетса на непрерывность. При численностях генотипов менее пяти использовали точный тест Фишера. Об ассоциации разных генотипов с заболеванием судили по величине отношения шансов (odds ratio (OR)) с расчетом для него 95% доверительного интервала, которая показывает, во сколько раз выше для индивида с определенным генотипом вероятность прогрессирования, рецидивирующего течения и неблагоприятного исхода инфекции. При OR=1 судили об отсутствии связи между сравниваемыми факторами, при OR<1 – об отрицательной связи и при OR>1 – о положительной связи признаков.
Как показало проведенное нами исследование, у пациентов с хронической герпесвирусной инфекцией было зарегистрировано снижение уровня спонтанной продукции ИЛ-2 (136,22±4,03 пг, р<0,05) относительно соответствующих показателей у здоровых доноров, что свидетельствует об угнетении цитокинсекретирующей функции мононуклеаров и может служить одним из факторов, определяющих несостоятельность защитного потенциала основных эффекторов антимикобактериального иммунного ответа – Тh1-лимфоцитов .
Как показал проведенный нами анализ полиморфизма T-330G промоторного участка гена ИЛ-2, у здоровых доноров преобладал генотип TT (59,8%), гетерозиготный вариант TG обнаруживался в 34,1% случаев, GG  – у 6,1% .Среди пациентов с хронической герпетической инфекцией гетерозиготный генотип ТG встречался в 55% случаев, гомозиготный вариант GG – у 5%, а ТТ – у 40%. Следует также отметить, что у пациентов с хронической герпетической инфекцией частота генотипа ТG оказалась достоверно выше (?2=2,31; р<0,05), чем у здоровых индивидов. Степень риска прогрессирования, рецидивирующего течения и неблагоприятного исхода инфекции была положительно ассоциирована с гетерозиготным генотипом ТG промоторного региона Т-330G гена ИЛ-2 (OR=2,009). Аллель Т и гомозиготный генотип ТТ полиморфизма T-330G гена ИЛ-2 обусловливали протективный эффект в отношении подверженности герпесвирусной инфекции. свидетельствующим о поляризации иммунного ответа в направлении Th2-пути.
Таким образом, иммуногенетическим фактором, обладающим протективным эффектом в отношении подверженности герпесвирусной инфекции, является гомозиготный генотип ТТ полиморфизма T-330G гена ИЛ-2. Степень риска прогрессирования, рецидивирующего течения и неблагоприятного исхода инфекции положительно ассоциирована с гетерозиготным ТG генотипом промоторного региона Т-330G гена ИЛ-2.

Список литературы:
1.    Баринский И. Ф.  Герпес: (этиология, диагностика, лечение) /  И. Ф. Баринский, Н. К. Шубладзе,  А. А. Каспаров, В. Н. Гребенюк. : Медицина, 1998 .-  112 с.
2.    Исаков В. А. Герпес: патогенез и лабораторная   диагностика/ В. А. Исаков, В. В. Борисова,  Д. В. Исаков. - СПб.: Лань, 1999. - 192 с.
3.    Львов Н. Д. Актуальные проблемы герпесвирусных инфекций /  Н. Д. Львов, А. В.   Мельниченко,  А. А. Никитина //  Вопросы вирусологии.  2000.- №4.- С. 7-13.