Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра фундаментальных основ клинической медицины

Цитокины, выступая в качестве клеточных медиаторов, оказывают влияние на разные этапы жизненного цикла иммунных клеток: процессы пролиферации, дифференцировки и клеточной гибели [1]. По данным литературы, IL-2 и IL-4 в зависимости от дозы, типа клетки, условий её окружения, стадии дифференцировки способны оказывать как про- так и антиапоптотический эффект. Механизм этого явления не вполне изучен. В связи с этим, целью настоящей работы явилась оценка дозозависимого влияния IL-2 и IL-4 на апоптоз лимфоцитов.
Материал и методы. В эксперименте in vitro использовались лимфоциты, полученные у 12 здоровых доноров (5 мужчин и 7 женщин в возрасте 22-30 лет). Для оценки проапоптотического эффекта цитокинов выделенные из венозной крови стандартным методом на градиенте плотности клетки культивировали в течение 18 ч при 370С и 5% СО2 в чистой среде RPMI-1640 либо в среде с добавлением рекомбинантных форм IL-2 (рIL-2) и IL-4 (рIL-4) в дозах от 0,015 до 1 нг/мл. При исследовании антиапоптотического действия цитокинов в питательную среду одновременно вносили дексаметазон в концентрации 10-4 моль/мл и цитокин (рIL-2 или рIL-4) в интервале доз от 0,025 до 0,15 нг/мл. После культивирования проводилась оценка апоптоза клеток с использованием аннексина V и пропидиум йодида на проточном цитометре Epics XL («Beckman Coulter», США) [2]. Проверку нормальности распределения количественных показателей осуществляли с использованием критерия Колмогорова-Смирнова. Для каждого анализируемого параметра вычисляли медиану (Ме), нижний и верхний квартили (Q1-Q3). Для определения достоверности различий между группами использовали непараметрический двусторонний критерий Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение. В ходе проведенного нами исследования было установлено, что рIL-2 проявляет свой проапоптотический эффект начиная с дозы 0,10 нг/мл, а рIL-4 – 0,15 нг/мл (рис. 1). При последующем увеличении концентрации рIL-2 и рIL-4 наблюдался рост количества апоптотически измененных лимфоцитов.
При добавлении в среду инкубации дексаметазона отмечалось пятикратное (48,60(47,10-52,20)) увеличение уровня апоптоза изучаемых клеток по сравнению с интактной культурой (9,71(8,06-10,40)). При одновременном внесении в культуральную среду дексаметазона и рIL-2 или рIL-4 количество апоптотически измененных лимфоцитов снижалось практически вдвое (33,90(31,80-35,80) и 27,44(24,20-32,40), соответственно). Антиапоптотический эффект рIL-2 начинал проявляться уже при дозе 0,025 нг/мл, а рIL-4 – при 0,050 нг/мл и продолжал усиливаться при нарастании концентрации интерлейкинов. Вероятно, это связано со способностью указанных цитокинов блокировать митохондриальный путь программированной гибели лимфоцитов, индуцируемый глюкокортикоидами.
Таким образом, результаты настоящей работы показали, что цитокины способны оказывать как анти-, так и проапоптотические эффекты в отношении лимфоцитов. Модулирующее влияние IL-2 и IL-4 на апоптотическую программу определяется их дозой, а также условиями клеточного окружения.

Список литературы:
1.    Ярилин, А. А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология / А. А. Ярилин. - 1996. - № 6. – С.10-23.
2.    Annexin V-affinity assay: a review on an apoptosis detection system based on phosphatidylserine exposure / M. Van Engeland, L. J. Nieland, F. C. Ramaekers et al. // Cytometry. – 1998. – Vol. 31, N 1. – P.1-9.