Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 70-й Юбилейной итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 16-18 мая 2011 г.), под ред. В. В. Новицкого, Л. М. Огородовой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. − 430 с.

 

Скачать сборник (формат MS Word, 7,3 мб)

Посмотреть основную информацию о сборнике, обложку и т.д.

 

Актуальность: все больше сведений указывают на важную патогенетическую роль повреждения клеток и тканей почек в развитии оксалатного нефролитиаза. Установлено, что повреждение уротелия способствует формированию первичного очага литогенеза на бляшках Рэндалла в интерстиции, прилегающем к тонкому отделу петли Генле, с последующим пенетрированием в просвет собирательных трубок, где происходит окончательное формирование камней. При этом в настоящее время преобладающим является мнение, согласно которому, повреждение эпителиоцитов канальцев почки при оксалатном нефролитиазе напрямую связано с активацией процесса свободно-радикального окисления (СРО) в почке.

Цель: определить закономерности патоморфологических изменений почки и особенности экспрессии показателей антиоксидантной защиты (митохондриальная супероксиддисмутаза) при этиленгликолевой модели оксалатного нефролитиаза.

Материалы и методы: экспериментальная модель оксалатного нефролитиаза была выполнена на 40 самцах белых крыс линии Wistar массой тела от 180 до 250г.
Все животные были разделены на две группы по 20 крыс. Крысы первой группы находились на общевиварном рационе, получали в качестве питья водопроводную воду, мочекаменная болезнь не инициировалась. Данная группа оставалась интактной и использовалась в качестве контрольной. Животные второй группы на фоне стандартной диеты получали в качестве питья 1% раствор этиленгликоля  в течение 21 суток, что индуцировало развитие экспериментальной модели оксалатного нефролитиаза.

Материалы и методы: материалом исследования послужила почка крысы. Для выявления отложений соединений кальция использовали импрегнацию серебром по методу Косса с контролем реакции 0,1% раствором соляной кислоты. Для определения экспрессии митохондриальной супероксиддисмутазы (СОД-2) проводили непрямой двухшаговый стрептавидин-биотиновый метод с контролем специфичности реакции. Восстановление антигенной специфичности производилась с помощью предварительной обработки срезов, погруженных в цитратный буфер (рН-6,0) в микроволновой печи при мощности 600 Вт 3 раза по 7 минут. В качестве первичных антител использовали антитела к СОД-2 (G-20: sc-18504), 1:100 Продукт реакции визуализировали с помощью системы Goat ABC Staining system: sc-2023 (Santa Cruz) и диаминобензидина (ДАБ).

Морфометрические исследования проводили с использованием программных пакетов ImageJ 1.43 и AxioVision 3.1. Степень экспрессии (в баллах – 1+, 2+, 3+) оценивали по интенсивности окрашивания ДАБ с применением программы анализа изображений ImageJ 1.43. Для удобства интерпретации результатов полученные данные рассчитывали по формуле:

 

  где E% – процент экспрессии, 256 – максимум интенсивности окраски, Dx – интенсивность окрашивания ДАБ.

 

 

Результаты работы представлены в виде значений Х (средняя), m (ошибка средней), p<0,05. Оценку межгрупповых различий проводили по критерию Данна и Манна-Уитни (SigmaStat 3.5 для Windows, Systat Software, Inc., США, 2006).

Результаты: у животных контрольной группы наблюдали нормальную гистологическую картину строения коркового и мозгового вещества почки. Кальциевые депозиты у крыс интактной группы гистохимически не верифицированы. Иммуногистохимическое исследование показало выраженную экспрессию (2+) СОД-2 в цитоплазме эпителиальных клеток канальцев нефрона, эпителиоцитах собирательных трубок.

Через 3 недели моделирования оксалатного нефролитиаза в почках наблюдались признаки повреждения эпителия канальцев и собирательных трубок в виде гидропической дистрофии, его десквамация, расширение канальцевой системы, слущенный эпителий и белковые депозиты в просвете канальцев.

Отложения соединений кальция обнаруживались в эпителии канальцев и собирательных трубок, в интерстиции мозгового вещества, в просветах собирательных трубок в составе белковых цилиндров. Характерной являлась локализация соединений кальция – преимущественно в области основания и средней трети почечного сосочка. В поле зрения определялись умеренные количества кальциевых депозитов (21,4±3,40), средним размером 16,5±0,60 мкм. Выявлялась инкрустация эпителия собирательных трубок соединениями кальция. В 10 % наблюдений обнаруживались довольно крупные микролиты (размером до 30-35 мкм) с обтурацией просвета собирательных трубок. В областях отложения кальция выявлялись разрастания соединительной ткани с формированием перитубулярного и периваскулярного фиброза. Определялось резкое снижение функциональной активности эпителиоцитов канальцев, содержащих в просвете микролиты.

Иммуногистохимическое исследование показало в целом уменьшение экспрессии СОД-2 в эпителиоцитах собирательных трубок (1+). Во внутренней зоне мозгового вещества этот показатель оказался статистически значимо сниженным, на 5,3% уступая цифрам интактных почек. В эпителиоцитах собирательных трубок, обтурированных камнем, снижение экспрессии СОД-2 достигало максимума и было на 7,5% ниже контрольных показателей. В отдельных случаях на некотором удалении от обтурирующих собирательные трубки камней в эпителиоцитах отмечалось определенное усиление экспрессии СОД-2.

Выводы: в ходе моделирования экспериментального оксалатного нефролитиаза в почках крыс отмечаются морфологические признаки ослабления функционирования системы ферментной антиоксидантной защиты. Более всего эти изменения выражены вблизи микролитов, обтурирующих собирательные трубки, что по своему местоположению соответствует зонам максимальной патогистологической перестройки тканей почки.