Научный руководитель: канд. биол. наук, асс. Ю.А. Лысенко

Воронежский государственный университет, г. Воронеж

Эта работа была опубликована в cборнике материалов I Всероссийской научной студенческой конференции с международным участием «МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ: ДОСТИЖЕНИЯ И ПЕРСПЕКТИВЫ», под редакцией проф., д-ра мед. наук С.И. Карася (г. Томск, 10-11 ноября 2011 года). 

Введение. Многочисленные экспериментальные данные свиде­тельствуют о неоднозначной роли системы иммунитета, в частности по-лиморфноядерных гранулоцитов, макрофагов и моноцитов, в развитии опухоли [2]. Обнаружены проявления как противоопухолевой, так и про-опухолевой активности компонентов иммунной системы, однако меха­низмы таких эффектов изучены не достаточно подробно. Исследование кривых хемилюминесценции крови и суспензии клеток перитонеального экссудата позволит оценить вклад фагоцитов в противоопухолевую ак­тивность иммунокомпетентных клеток [1].

Цель работы. Исследование изменений параметров стимулиро­ванной латексом люминолзависимой хемилюминесценции фагоцитиру­ющих клеток крови и перитонеального экссудата мышей с асцитной кар­циномой Эрлиха (АКЭ) на различных стадиях развития опухоли.

Материал и методы. В качестве объектов исследования использо­вали образцы периферической крови и перитонеального экссудата мы­шей-самцов аутбредного стока NMRI в возрасте 2—3 мес. Суспензию клеток асцитной карциномы Эрлиха перевивали интраперитонеально на стадии экспоненциального роста опухоли (7-е сут). Общую концентра­цию лейкоцитов определяли с помощью камеры Горяева. Дифференци­альный подсчет лейкоцитарных клеток осуществляли после окраски вы­сушенных мазков по методу Романовского—Гимза с использованием микроскопа Микмед-1. Интегральную интенсивность стимулированной латексом люминолзависимой хемилюминесценции регистрировали с помощью биохемилюминометра БХЛ-07 (Россия) в течение 30 мин. Об­работку экспериментальных данных осуществляли с помощью програм­мы «Люм-1». Концентрация клеток в исследуемых образцах составляла 4-10⁶ кл./мл.

Результаты и обсуждение. Нами зарегистрированы кривые хеми-люминесценции крови здоровых мышей и животных на седьмые сутки развития АКЭ. Выявлено, что кривые хемилюминесценции крови харак­теризуются двумя пиками свечения. Максимальная интенсивность вто­рого пика люминесценции (95,4±38,4 с) здоровых животных составила 17,5±2,8 отн. ед. На 7-сут развития опухоли значение данного показате­ля возрастало до 34,0±13,3 отн. ед. При этом происходило также увели­чение времени регистрации максимального свечения на 415 с по срав­нению со значением контрольного образца.

Нами зарегистрированы значения интенсивности пиков хемилюми-несценции клеток перитонеального экссудата на различных стадиях развития АКЭ. Кривые хемилюминесценции перитонеального экссудата отличались от таковых крови мышей наличием лишь одного максимума свечения. В суспензии клеток перитонеального смыва здоровых живот­ных интенсивность свечения составила 9,0±2,4 отн. ед.; на 2-е, 7-е, 8-е и 13 сут после имплантации АКЭ - 45,0±15,2; 77,0±12,5; 22,5±10,3 и 23,5±4,9 отн. ед. соответственно, а время достижения максимального значения интенсивности хемилюминесценции - 429,0±94,2; 454,0±76,7; 322,2±168,2 и 170,0±95,69 с соответственно.

Также нами исследованы изменения процентного соотношения кле­точных популяций перитонеального экссудата в ходе пролиферации ас-цитной карциномы Эрлиха. У здоровых мышей в образцах перитонеаль-ного смыва выявлялось 65 % лимфоцитов, 10 % нейтрофилов, 18 % макрофагов, 5 % эритроцитов и 2 % клеток мезотелия. На вторые сутки после имплантации АКЭ доля лимфоцитов увеличилась до 70 %, а со­держание нейтрофилов и макрофагов снизилось до 5 %. При этом клет­ки карциномы составляли 20 % от общего числа клеток. На 7-е сут раз­вития АКЭ в клеточной популяции доминировали клетки опухоли (76 %), также в одинаковой пропорции наблюдались лимфоцитарные клетки и нейтрофилы. На 8-е сут развития опухоли выявлялись следующие кле­точные популяции: лимфоциты (10 %), нейтрофилы (3 %), клетки карци­номы (82 %), макрофаги (3 %), эритроциты (2 %). Терминальная стадия развития АКЭ характеризовалась наличием помимо вышеуказанных ти­пов клеток существенного (10 %) числа эритроцитов. Выводы:

1.       Кривая люминолзависимой хемилюминесценции крови здоровых мышей и животных с асцитной карциномой Эрлиха характеризуется двумя максимумами интенсивности хемилюминесценции.

2.       На 7 сутки развития АКЭ наблюдается увеличение времени до­стижения максимальной интенсивности второго пика свечения, что мо­жет быть вызвано модулирующим действием развивающейся опухоли на функциональные свойства нейтрофильных лейкоцитов. При этом в перитонеальном экссудате обнаруживается равное процентное соотно­шение нейтрофилов и лимфоцитов, в то время как на начальных стади­ях развития опухоли (2 сут) в суспензии доминируют лимфоцитарные клетки.

3.       Максимальное значение интенсивности вспышки хемилюминес-ценции в образце перитонеального экссудата наблюдается на 7-е сутки развития АКЭ. К 13-м сут пролиферации опухоли происходит уменьше­ние лаг-периода развития хемилюминесцентного ответа фагоцитирую­щих клеток.

Таким образом, экспериментальные данные демонстрируют моду­лирующее действие опухоли по отношению к клеткам иммунной систе­мы мышей, что согласуется с литературными данными [3]. На начальных стадиях развития опухоли наблюдается активация защитных реакций, о чём свидетельствует повышение максимальной интенсивности люми­несценции фагоцитов к 7-м суткам развития неоплазмы как в крови жи­вотных, так и в перитонеальном экссудате. На более поздних стадиях развития АКЭ клетки опухоли, по всей видимости, оказывают угнетаю­щее действие на функциональные свойства фагоцитирующих лейкоци­тов, что выражается в снижении уровня генерации ими активных форм кислорода.

Список литературы:

1.           Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция / Ю.А. Владимиров, Е.В. Проскурина // Успехи биологической химии. - 2009. - Т. 49. - С. 341-388.

2.              Мальцева В.Н. Неоднозначность нейтрофила в генезе опухоли / В.Н. Мальцева, В.Г. Сафронова // Цитология. - 2009. - Т 51, № 6. - С. 469-474.

3.              Пальцев М.А. Межклеточные взаимодействия // М.А. Пальцев. - М. : Медицина, 1995. - 224 с.