Научный руководитель: канд. биол. наук, доц. О.В. Башарина

Воронежский государственный университет, г. Воронеж

Эта работа была опубликована в cборнике материалов I Всероссийской научной студенческой конференции с международным участием «МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ: ДОСТИЖЕНИЯ И ПЕРСПЕКТИВЫ», под редакцией проф., д-ра мед. наук С.И. Карася (г. Томск, 10-11 ноября 2011 года). 

Введение. Одной из актуальных задач фотоиммунологии является выяснение механизмов терапевтического действия УФ-света. Ауто-трансфузия УФ-облученной крови (АУФОК) широко используется в раз­личных областях клинической медицины. Установлено, что использова­ние этого метода для лечения широкого спектра заболеваний сопровож­дается улучшением иммунологического статуса организма, которое мо­жет быть следствием структурно-функциональных изменений иммуно-компетентных клеток крови, индуцируемых при действии на нее УФ-света в терапевтических дозах [1].

Процесс развития иммунного ответа организма на проникновение инфекции или какие-либо другие воздействия сопровождается значи­тельными изменениями состава иммунокомпетентных клеток, в том чис­ле происходит появление на клеточной поверхности определенных функциональных молекул - внутриклеточных маркеров [2, 3]. Модуляция экспрессии функционально значимых молекул является одним из эф­фективных механизмов иммунорегуляции в условиях воздействия УФ-излучения.

Цель работы. В связи с вышесказанным целью работы явилось изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD3 - поверхностно­го маркера Т-лимфоцитов и CD19 - мембранного гликопротеида, прини­мающего участие в регулировании развития В-лимфоцитов, их актива­ции и дифференцировки. Представлялось важным исследовать измене­ние уровня экспрессии указанных маркеров на поверхности лимфоцитов в присутствии плазмы крови и циклогексимида в ходе суточной инкуба­ции.

Материал и методы. Объект исследования - лимфоциты крови до­норов. Выделение лимфоцитов из периферической крови доноров осу­ществляли путем ее центрифугирования в градиенте плотности фиколл-урографина (р=1,077 г/см³).

УФ-облучение лимфоцитов (210⁶ клеток/мл) проводили при их не­прерывном перемешивании магнитной мешалкой в термостатируемой кювете (20±1 °С) с помощью ртутно-кварцевой лампы типа ДРТ-400 че­рез светофильтр УФС-1 с полосой пропускания 240-390 нм в течение 1 и 5 минут. Интенсивность облучения составила 151 Дж/(м²мин). Объем вносимого в кювету образца - 2 мл.

Нативные и облученные лимфоциты инкубировали в питательной среде RPMI-1640 в отсутствие и в присутствии циклогексимида (10^-4 моль/л) и в присутствии аутологично плазмы крови (18%) при темпера­туре 37 °С в атмосфере с [СО₂] = 5 %.

Влияние УФ-излучения на уровень экспрессии молекул рецептор-ного комплекса CD3 и CD19 на поверхности мембран Т- и В-лимфоцитов соответственно определяли с помощью метода проточной цитофлуори-метрии. Измерения проводили на цитофлуориметре CyFLOW space (Partec). Двойное окрашивание клеток проводили с использованием мо-ноклональных антител CD3 (FITC), CD19 (PE; Beckman Coulter, USA).

Результаты и обсуждение. В результате проведенного исследова­ния нами было выявлено незначительное снижение в ходе суточной ин­кубации (в отсутствие плазмы) уровня экспрессии как CD3, так и CD19 рецепторов. Это может быть обусловлено тем, что при отсутствии ро­стовых факторов, содержащихся в плазме, синтез белка de novo не про­исходит, поскольку уровень экспрессии изученных маркеров при инкуба­ции лимфоцитов в присутствии циклогексимида такой же, как и при ин­кубации клеток без него. При инкубации в присутствии плазмы уровень экспрессии CD3 и CD19 не отличается от значения данного параметра у нативных клеток непосредственно после выделения.

При воздействии УФ-света в дозе 151 Дж/м² на лимфоциты проис­ходит статистически достоверное понижение уровня экспрессии иссле­дуемых маркеров в ходе суточной инкубации без плазмы по отношению к таковому для нативных инкубированных клеток.

В ходе инкубации облученных клеток в присутствии плазмы наблю­дается увеличение уровня экспрессии CD3 и CD19 рецепторов по срав­нению с необлученными клетками после инкубации без плазмы. Уста­новлено, что в присутствии циклогексимида происходит значительное (почти в два раза) снижение экспрессии CD3 и CD19 рецепторов по сравнению с данным параметром у интактных клеток. Следовательно, повышение уровня экспрессии CD3 и CD19 маркеров в облученных лимфоцитах связано с активацией синтеза данных белков в присутствии аутологичной плазмы. Это может быть обусловлено тем, что при УФ-облучении происходит образование АФК, которые вызывают переход транскрипционных факторов в активное состояние.

Выводы.

1.     Было выявлено снижение уровня экспрессии CD3 и CD19 рецеп­торов в ходе суточной инкубации лимфоцитов без плазмы. При инкуба­ции в присутствии плазмы уровень экспрессии CD3 и CD19 не отличает­ся от значения данного параметра у нативных клеток.

2.     При воздействии УФ-света на лимфоциты в дозе 151 Дж/м² проис­ходит понижение уровня экспрессии CD3 и CD19 маркеров в ходе суточ­ной инкубации без плазмы по сравнению с необлученными клетками.

3.     В ходе инкубации облученных клеток в присутствии плазмы выяв­лено увеличение уровня экспрессии CD3 и CD19 рецепторов по сравне­нию с инкубированными необлученными клетками.

4.     Повышение уровня экспрессии маркеров CD3 и CD19 в облучен­ных лимфоцитах при инкубации в присутствии плазмы обусловлено ак­тивацией синтеза белков.

Список литературы:

1.              Карандашов В. И. Фототерапия / В. И. Гольдштейн, Петухов Е. Б., Зродников В. С. - М.: Медицина, 2001. - 392 с.

2.              Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. - М.: Мир, 2000. - 581 с.

Фрейдлин И.С., Тотолян А.А. Клетки иммунной системы (III-V). - СПб.: Наука, 2001. - 390 с.