Научный руководитель: канд. биол. наук И.А. Колтаков

Воронежский государственный университет, г. Воронеж

  Эта работа была опубликована в cборнике материалов I Всероссийской научной студенческой конференции с международным участием «МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ: ДОСТИЖЕНИЯ И ПЕРСПЕКТИВЫ», под редакцией проф., д-ра мед. наук С.И. Карася (г. Томск, 10-11 ноября 2011 года).

Введение. В последнее время в медицинской практике при лечении ряда заболеваний широкое распространение получила аутотрансфузия фотомодифицированной крови (АУФОК-терапия), предусматривающая фотомодификацию крови за счет воздействия УФ-диапазона оптическо­го излучения [1,3]. В связи с этим определённый практический интерес представляет изучение влияния УФ-света на функциональную актив­ность иммунокомпетентных клеток. Одними из первых иммунокомпе-тентных клеток, отвечающих на повреждающие факторы и антигенную агрессию, являются нейтрофильные лейкоциты. Сочетание высокого эффекторного потенциала со способностью к быстрой его реализации делает эти клетки главными участниками ранней ответной реакции и универсальными индикаторами любых изменений в организме [2].

Цель работы. Изучение влияния УФ-облучения на экспрессию ко-рецептора TLR-4 - CD14 маркера, отвечающего за распознавание бак­териальных липополисахаридов, и HLA-DR маркеров, отвечающих за презентацию чужеродных антигенов лимфоцитам нейтрофилами крови человека.

Материал и методы. Исследования были проведены на нейтрофи-лах периферической крови 12 доноров. Клетки выделяли методом се­диментации на двойном градиенте плотности фиколл-урографина (р₁=1,119 г/см³, р₂=1,077 г/см³). Облучение полиморфно-ядерных лейко­цитов осуществляли светом ртутно-кварцевой лампы ДРТ-400 в диапа­зоне длин волн (240-390 нм) в дозах 151, 453, 906 и 1359 Дж/м². Уровень экспрессии CD14 и HLA-DR маркеров на поверхности мембран исследу­емых иммунокомпетентных клеток определяли методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа по стандартной методике с использованием моноклональных антител против CD14 и HLA-DR анти­генов человека и конъюгата бараньих антител против IgG мыши с перок-сидазой хрена («Сорбент», Москва). Результаты экспериментов реги­стрировали спектрофотометрически при Л=492 нм на ИФА-анализаторе «АИФР-01 "Униплан"» (Пикон, Москва). Обработку результатов проводи­ли с использованием статистического пакета "Statistica 8.0". Достовер­ность отличий сравниваемых показателей оценивали с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение. По исходному уровню экспрессии CD14 маркера на поверхности мембран клеток доноры были разделены на две группы. В первой группе (7 доноров) с исходным уровнем экспрессии 0,560 ± 0,036 ед. опт. пл. наблюдалось статистически достоверное уве­личение исследуемого показателя на 10, 8, 13 и 6 % по отношению к та­ковому для интактных клеток при дозах облучения 151, 453, 906 и 1359 Дж/м² соответственно. Во второй группе (5 доноров) с исходно более низким уровнем экспрессии CD14 (0,486 ± 0, 028) наблюдалось умень­шение экспрессии данного маркера на 12, 13, 22 и 10% по сравнению с контролем соответственно при тех же дозах облучения.

По изменению уровня экспрессии HLA-маркеров доноры также бы­ли разделены на две группы. В первой группе с исходным уровнем экс­прессии 0,560 ± 0,026 ед. опт. пл. при облучении в дозах 151, 453 и 1359 Дж/м² наблюдалось увеличение экспрессии на 6, 5 и 1% по сравнению с таковой у необлученных клеток соответственно. Во второй группе с ис­ходно более низким уровнем экспрессии (0,421 ± 0,041) наблюдалось снижение экспрессии HLA маркеров на 10, 12 и 14 % по сравнению с контрольным показателем при воздействии УФ-света в дозах 151, 453 и 906 Дж/м² соответственно.

Таким образом, для образцов нейтрофилов с исходно высоким уровнем экспрессии исследуемых маркеров наблюдается яркое стиму­лирующее действие УФ-света. В том случае, если исходный уровень экспрессии исследуемых поверхностных дифференцировочных антиге­нов ниже среднего уровня, величина регистрируемого показателя суще­ственно снижается под действием УФ-света. Наблюдаемые эффекты могут быть связаны с тем, что у лиц с исходно заниженным уровнем ис­следуемых антигенов могут иметь место существенные функциональ­ные нарушения, которые, вероятно, могут проявляться в блокировании процессов синтеза мембранных маркеров или же их токсической инакти­вации вследствие накопления продуктов ПОЛ. Вывод:

УФ-излучение в дозах 151, 453, 906 и 1359 Дж/м² вызывает измене­ния экспрессии CD14 и HLA-DR поверхностных антигенов нейтрофилов человека, характер которых зависит от исходного уровня этих антигенов.

Полученные результаты могут быть использованы при обсуждении вопросов, касающихся особенностей функционирования нейтрофилов крови человека в условиях воздействия УФ-света.

Список литературы:

1.             Биофизика / под ред. В.Г. Артюхова. - М.: Академический Проект; Екатеринбург: Деловая книга. - 2009. - 294с.

2.             Бахов Н.И. Механизмы защиты организма от вирусных инфекций: нейтрофиль-ные лейкоциты / Н.И. Бахов, Ю.Ф. Майчук, A.B. Корнев // Успехи современной биологии. - 2000. - № 1. - С. 23-25.