|
Институт экологии человека СО РАН (г. Кемерово)
Эта работа опубликована в сборнике "Науки о человеке": материалы VI конгресса молодых ученых и специалистов / Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2005. – 120 с.
Скачать сборник целиком
Солями серебра способны окрашиваться негистоновые белки РНП, входящие в состав ядрышка [1]. Размер аргентофильных зон ядра напрямую зависит от транскрипционной активности рибосомных генов. Неоднократно предпринимались попытки оценить размер этих зон визуально или с помощью окуляр-микрометра, но такие оценки заведомо субъективны и не позволяют судить о размерах объектов сложных форм. Между тем, такой анализ может иметь диагностическое и прогностическое значение при анализе раковых клеток, при оценке последствий генотоксических воздействий, при исследовании этнической специфики в функциональной активности генов. Анализ арген-тофильных зон ядра для решения таких задач должен отличаться точностью, воспроизводимостью и быстротой. В связи с этим, целью исследования стала оценка возможностей использования компьютерного анализа видеоизображений для учета площади аргентофильной зоны сложной морфологии.
Материал и методы. В качестве объекта исследования были выбраны лимфоциты периферической крови, культивированные 48ч в присутствии ФГА, согласно стандартной методике [2]. Клетки раскапывали на предметные стекла, которые затем окрашивали 50% нитратом серебра 15 мин при 58оС. Аргентофильные зоны в ядрах в лимфобластов отличаются сложной формой (ядрышки компактного, нуклео-лонемного типа, с лопастями или множественные ядрышки). Клетки анализировали с помощью микроскопа Zeiss. Изображения, полученные с помощью цифровой видеокамеры, обрабатывали с помощью пакета программ Inpac4 for Sincro4 (version 5. 1. 00 beta2, GmbH & Co KG). Размер ядер и аргентофильных зон оценивали с помощью пакета программ AxioVision 3. 1.
Результаты и обсуждение. Использовавшееся программное обеспечение позволило: получать четкие изображения, выделять арген-тофильные зоны как в ручном, так и автоматическом режиме и сразу оценивать их площадь в пикселях. Тестовые анализы, проведенные разными операторами, оказались сопоставимыми. Скорость анализа - примерно 2 мин на клетку. Поэтому, исходя из воспроизводимости данных и быстроты получения результатов, данный метод может быть рекомендован к использованию в системе генетического скрининга.
Литература:
1. Goodpasture C., Bloom S. E. Visualization of nucleolar organizer regions in mammalian chromosomes using silver staining // Chromosoma. -1975. - Vol. 53. - P. - 37 - 50.
2. Hungerford D. F. Leucocytes cultured from smoll inocula of whole blood hypotonic KCl // Stain Technol. - 1965. - V. 40. - P. 333-338.
|
