Labirint.ru - ваш проводник по лабиринту книг
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -ГлавнаяОб АльманахеРецензентыАрхив телеконференций- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Сборники АльманахаДругие сборникиНаучные труды- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Образец оформленияИнформационное письмоО проведении телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Материалы I телеконференцииМатериалы II телеконференцииМатериалы III телеконференцииМатериалы IV телеконференцииМатериалы V телеконференцииМатериалы VI телеконференцииМатериалы VII телеконференцииМатериалы VIII телеконференцииМатериалы IX телеконференцииМатериалы Х телеконференцииМатериалы XI телеконференцииМатериалы XII телеконференцииМатериалы XIII телеконференцииУчастники XIII телеконференцииМатериалы XIV телеконференцииУчастники XIV телеконференцииЮбилейная XV Телеконференция Октябрь 2014Участники Юбилейной XV Телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Конференция СМПиЧ-2015Участники СМПиЧ-2015- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -КонтактыФорум
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Поиск по сайту

Последние статьи

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ ВЛИЯНИЕ ВИРУСНОИ ИНФЕКЦИИ КЛЕЩЕВЫМ ЭНЦЕФАЛИТОМ НА ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕДИКТОРЫ БОЛЕЗНИ РОЛЬ ГЕНА GSTM1 В ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ КЛЕТОК КРОВИ и ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ СПЕРМАТОЗОИДОВ ПРИ ГРАНУЛОЦИТАРНОМ АНАПЛАЗМОЗЕ ЧЕЛОВЕКА ГЕНЕТИЧЕСКИИ ПОЛИМОРФИЗМ И ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ Т- ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ АРТРИТОМ, АССОЦИИРОВАННЫМ В КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ КЛИНИЧЕСКИЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ИКСОДОВОГО ВЕСЕННЕ-ЛЕТНЕГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫИ СТАТУС И АДАПТИВНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ОРГАНИЗМА ПЕРВОКЛАССНИКОВ ШКОЛ г. НЕФТЕЮГАНСКА ТЮМЕНСКОИ ОБЛАСТИ Материалы трудов участников 14-ой международной выездной конференции русскоязычных ученых в Китае (Sanya, Haynan Island) "Современный мир, природа и человек", том 8, №3. ПРОЛИФЕРАТИВНЫЕ И АПОПТОТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ В ПРОЦЕССЕ СТИМУЛЯЦИИ АНТИГЕНОМ БОРРЕЛИИ THE ANALYSIS OF SOME INDICES OF IMMUNERESPONSE, DNA REPAIR, AND MICRONUCLEI CONTENT IN CELLS FROM TICK-BORNE ENCEPHALITIS PATIENTS КОМПЬЮТЕРНЫИ СПЕКТРАЛЬНЫИ МОРФОМЕТРИЧЕСКИИ АНАЛИЗ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОИ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ И ГРАНУЛОЦИТАРНЫМ ЭРЛИХИОЗОМ ЧЕЛОВЕКА

Полезная информация

 
 

КОНСТРУИРОВАНИЕ МИКРОЧАСТИЦ, СОДЕРЖАЩИХ РЕКОМБИНАНТНЫЙ АНТИГЕН ESAT-6 ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ТУБЕРКУЛЁЗА

Печать E-mail
20.12.2010 г.

Лаборатория молекулярной биологии туберкулеза НИИ биоинженерии ГНЦВБ «Вектор» (п. Кольцово)

Эта работа опубликована в сборнике "Науки  о  человеке":  материалы VI  конгресса  молодых  ученых  и  специалистов / Под  ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2005. – 120 с.

Скачать сборник целиком

Туберкулёз вызывается внутриклеточным патогеном Mycobacterium tuberculosis и ответственен за 8 млн. новых случаев заболевания туберкулёзом ежегодно, из которых 3 млн. заканчиваются летальным исходом. BCG - является широко применяемой противотуберкулёзной вакциной. Но в основном она индуцирует высокий уровень защиты против туберкулёза на животной модели инфекции. Однако, для человека её эффективность является труднопрогнозируемым фактором, который может изменяться от 0 до 80%. Вакцинация BCG не обеспечила контроля над туберкулёзной инфекцией, что указывает на необходимость создания новых, более действенных вакцин. Наша стратегия направлена на один из наиболее перспективных подходов- ДНК-вакцину в качестве компонента вирусоподобных частиц (ВПЧ). ДНК вакцина способна индуцировать как гуморальный, так и Т-клеточный иммунные ответы. Методология создания таких частиц была разработана в ГНЦ ВБ «Вектор» и апробирована на примере кандидатной вакцины против ВИЧ инфекции. Эти частицы представляют собой полинуклеотидный комплекс (двуспиральная РНК или плазмидная ДНК, кодирующая антигены), окруженный полисахаридной матрицей, состоящей из молекул полиглюкина.
Целью данной работы явилась оценка перспективности использования ВПЧ в качестве системы доставки ДНК-вакцин против туберкулёза на животной модели.
В качестве объекта исследования был выбран антиген ESAT-6, который является доминантной мишенью для Т-клеточного иммунитета на ранней стадии инфекции у пациентов так же, как и на различных животных моделях.
Для получения рекомбинантного белка ESAT6 его ген был клонирован в плазмиду pGEX-2T("Invitrogen", США). Структура полученной конструкции была подтверждена рестрикционным анализом. Гибридный белок GST-ESAT6 был наработан культуре клеток E.coli и выделен с помощью аффинной хроматографии на глутатион-сефарозе 4В. Продукцию белка GST- ESAT-6 оценивали с помощью SDS-электрофореза и иммуноблоттинга. Молекулярная масса гибридного полипептида составила около 40 кДа, что соответствует ожидаемой. Для создания ДНК-вакцины ген ESAT6 был клонирован под контроль эукариотического промотора в плазмиду pcDNA3.1mychislacZ(-) ("Invitrogen", США). Структура полученной конструкции была подтверждена рестрикционным анализом и секвенированием методом Сен-гера.
Далее была   создана  экспериментальная   конструкция на основе микрочастиц, содержащих рекомбинантную ДНК pcDNA3.1mychislacZ(-)/ESAT6. Для сборки искусственной микобактериальной частицы в качестве "центрального ядра" использовали плазмидную ДНК pcDNA3.1mychislacZ(-)/ESAT6, которую инкубировали с активированным коньюга-том, и образовавшийся комплекс отделяли гель-фильтрацией на колонке с сефарозой CL-6B. Сборку частиц контролировали с помощью электрофореза по разнице подвижности нук-леотидного материала в нативной форме и в составе частиц, а так же по устойчивости нуклеотидного материала к обработке ДНКазой. Опыт показал, что если для исходной плазмидной ДНК полная деградация наблюдалась уже через 1 час инкубации, то в собранной конструкции нуклеотидный материал сохранялся интактным в течение 9 часов.
КОНСТРУИРОВАНИЕ МИКРОЧАСТИЦ, СОДЕРЖАЩИХ РЕКОМБИНАНТНЫЙ АНТИГЕН ESAT-6  ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ТУБЕРКУЛЁЗА При электронном микроскопировании частицы имели в основном шарообразный вид,10-20нм в диаметре (рис.) После троекратной иммунизации такой конструкцией (по 10 мкг на инъекцию) у мышей на 7 и 21 сутки после начала опыта индекс стимуляции спленоцитов был достоверно выше такового для неиммунизированных мышей, что подтверждает иммуногенность экспериментального препарата.
Таким образом, получен экспериментальный препарат в виде вирусоподобных частиц, содержащий микобактериальный Т-клеточный антиген ESAT6. В дальнейшем планируется изучение его иммуногенных и протективных свойств и сравнение с защитным эффектом, создаваемым вакциной BCG на мышиной модели туберкулёза.



 

Комментарии  

  1. #1 мария Написать письмо
    2011-04-0819:28:46 скажите пожалуйсто микро честица ДНК туберкулёза обноружина она заразна

Добавить комментарий

Правила! Запрещается ругаться матом, оскорблять участников/авторов, спамить, давать рекламу.



Защитный код
Обновить

« Пред.   След. »
 
 
Альманах Научных Открытий. Все права защищены.
Copyright (c) 2008-2022.
Копирование материалов возможно только при наличии активной ссылки на наш сайт.

Warning: require_once(/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php) [function.require-once]: failed to open stream: Нет такого файла или каталога in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 99

Fatal error: require_once() [function.require]: Failed opening required '/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php' (include_path='.:/usr/local/zend-5.2/share/pear') in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 99