Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

Распространение заболеваний, имеющих в своей основе хроническое воспаление [1], определяет необходимость изучения механизмов формирования и функционирования полинуклеарных фагоцитов, поскольку они активно участвуют в образовании очагов хронического воспаления [3]. При этом известно, что существует взаимосвязь между генотипом и характером иммунного ответа организма [2]. 
Цель исследования заключалась в определении морфофункциональных изменений в многоядерных макрофагах, принадлежащих генетически различным организмам. Задачи исследования включали: определение численности многоядерных и секреторных многоядерных макрофагов, частоты встречаемости секреторных клеток с микроядрами и полинуклеаров с признаками выделения клеточных территорий.
Клетки выделяли из брюшной полости мышей линий C57BL/6 и CBA. Концентрация посадки составляла 1000 тыс. перитонеальных клеток в 1 мл взвеси. Результаты оценивали на 72, 96 и 120 часов инкубации. К морфологическим признакам активно секретирующих макрофагов относили наличие светлой вакуоляризированной цитоплазмы и светлого ядра (содержащего большой объем эухроматина).
Было отмечено, что в культурах перитонеальных клеток, полученных от животных обеих линий, присутствуют три морфологически различных типа активно секретирующих многоядерных макрофагов. К первому типу относили клетки со светлыми ядрами, имеющие светлую вакуоляризированную цитоплазму (с большим количеством мелких секреторных гранул), что являлось морфологическим отражением повышенной синтетической и секреторной активности.
Клетки второго типа (помимо вышеперечисленных признаков) характеризовались наличием светлого ободка вокруг одного или нескольких ядер. Это, вероятно, указывало на развитый аппарат Гольджи. Такие макрофаги, возможно, вносили наиболее значимый (в относительном плане) вклад в продукцию различного рода факторов, чем другие клетки, присутствующие в культуре.
Макрофаги третьего типа имели участок более плотной (темной) цитоплазмы, располагавшийся обычно в центральной части клетки, что свидетельствовало о наличии в нем большего количества органелл, которые находились непосредственно между ядрами, и в ряде случаев смещали ядра на периферию. Наиболее вероятной причиной формирования комплекса органелл можно считать процесс интеграции внутриклеточных структур.
Присутствие в культурах перитонеальных клеток единичных макрофагов с ацидофильной цитоплазмой, объясняется накоплением в них кислых продуктов метаболизма и свидетельствует об испытываемом ацидозе, который указывает на неблагоприятные условия существования клеток на поздних сроках инкубации.
На 72 часа экспозиции отсутствовали достоверные межгрупповые различия показателей численности секреторных многоядерных макрофагов и их типов в зависимости от генетической принадлежности клеток. Общее содержание секреторных многоядерных клеток в обеих группах составляло в среднем 50,7 % от числа всех многоядерных макрофагов. Среднее количество секреторных макрофагов, отнесенных к первому, ко второму и к третьему морфологическим типам составляло 64,4 %, 8,5 % и 28 %, соответственно.
Независимо от сроков инкубации культур перитонеальных клеток и их генетической принадлежности достоверных различий между показателями концентрации многоядерных макрофагов, имевших в своем составе микроядра - не наблюдали. Среднее число секреторных многоядерных макрофагов, содержащих микроядра составляло 10 + 2,9 %. Данный показатель для секреторных одноядерных макрофагов в среднем соответствовал значению 0,9 %.
Формирование микроядер в клетках может свидетельствовать о нестабильности функционирования секреторных полинуклеаров. Однако данный показатель не зависел от секреторной активности, и на это косвенно указывал низкий уровень встречаемости одноядерных секреторных клеток с микроядрами. Поэтому наиболее вероятной причиной формирования данных структур в полинуклеарных макрофагах следует считать процесс, направленный на удаление части ядерного материала, подвергшегося повреждению, что необходимо для адекватного функционирования многоядерных клеток. Этот механизм, вероятно, имеет репаративное значение.
При увеличении сроков инкубации культур перитонеальных клеток, полученных от животных обеих линий, отмечали наличие косвенных морфологических признаков начального этапа фрагментации единичных полинуклеарных макрофагов. Эти клетки преимущественно характеризовались тем, что имели три и более ядер, а признаки начавшегося процесса отделения наблюдали, как правило, у одного ядра с участком цитоплазмы. Данный процесс, вероятно, может быть расценен, как этап дифференцировки многоядерных клеток.
Таким образом, было установлено наличие нескольких типов многоядерных макрофагов, инкубируемых in vitro, что является морфологическим выражением протекающих в клетках процессов, и свидетельствует о гетерогенности популяции секреторных макрофагов, вероятно, различающихся по степени активности. Согласно результатам проведенного исследования, генетическая принадлежность культур не оказывала влияния на активность формирования полинуклеарных секреторных макрофагов и на процентное соотношение между различными типами данных клеток. Частота встречаемости многоядерных секреторных макрофагов, имевших микроядра не зависела от генетической принадлежности и времени экспозиции культур. При значительном увеличении времени инкубации наблюдали появление первоначальных признаков фрагментации полинуклеаров.
Полученные результаты свидетельствуют об особенностях поведения секреторных многоядерных макрофагов в интактных культурах перитонеальных клеток, что может быть использовано при разработке различных моделей функционирования секреторных полинуклеаров in vitro.

Список литературы:
1. Васильев А.В., Гришко А.Н. // Внелёгочный туберкулёз. СПб., 2000. - С.11-33.
2. Alcais A., Sanchez F.O., Thuc N.V., Lap V.D., Oberti J., Lagrange P.H., Schurr E., Abel L. Granulomatous reaction to intradermal injection of lepromin (Mitsuda reaction) is linked to the human NRAMP1 gene in Vietnamese leprosy sibships. // J. Infect. Dis. - 2000. - V. 181. - № 1. - P. 302 - 308.
3. Jinnouchi K., Terasaki Y., Fujiyama S., Tomita K., Kuziel W.A., Maeda N., Takahashi K., Takeya M. Impaired hepatic granuloma formation in mice deficient in C-C chemokine receptor 2. // J. Pathol. - 2003. - V. 200. - № 3. - Р. 406 - 416.