Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 70-й Юбилейной итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 16-18 мая 2011 г.), под ред. В. В. Новицкого, Л. М. Огородовой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. − 430 с.

 

Скачать сборник (формат MS Word, 7,3 мб)

Посмотреть основную информацию о сборнике, обложку и т.д.

 

Актуальность: в клеточный состав туберкулезной гранулемы наряду с лимфоцитами, макрофагами и другими клеточными элементами входят также эозинофильные гранулоциты. Вместе с тем содержание эозинофилов в периферической крови при туберкулезе легких (ТЛ) нередко может быть повышенным [1]. В настоящее время показано, что эозинофильные лейкоциты обладают не только выраженными цитотоксическими свойствами, но и выступают в качестве активных продуцентов медиаторов клеточного и гуморального звена иммунного ответа [2]. Ключевым Th1-цитокином, участвующим в регуляции механизмов антибактериальной резистентности макроорганизма, является фактор некроза опухолей (TNF)-α, локальное высвобождение которого приводит к усилению хемотаксиса клеток, активации фагоцитоза, повышенной продукции провоспалительных факторов, реэкспрессии молекул HLA I/II, сдвигу цитокинового баланса в сторону Th1. Роль TNF-α при туберкулезной инфекции неоднозначна и определяется его количественным содержанием: дефицит продукции медиатора опосредует тяжелое течение инфекционного процесса с нарушением процесса гранулемообразования, в свою очередь, слишком высокая секреция TNF-α способна запускать каскад деструктивных изменений в легких [3]. Учитывая способность эозинофильных гранулоцитов секретировать основные цитокины противотуберкулезного иммунитета, в частности TNF-α, логично предположить, что эти клетки активно участвуют в механизмах формирования специфического туберкулезного воспаления.

 

Цель: оценить продукцию TNF-α эозинофилами периферической крови in vitro у больных ТЛ.

Задачи:

1. Установить  общие закономерности и особенности продукции TNF-α эозинофильными клетками при ТЛ в зависимости от наличия эозинофильной реакции крови.
2. Оценить уровни базальной и BCG-индуцированной секреции TNF-α эозинофилами периферической крови у больных ТЛ.

Материал и методы: в программу исследования вошли 35 больных (мужчин и женщин) с впервые выявленным распространенным деструктивным ТЛ: 16 пациентов с ТЛ, сопровождающимся эозинофилией (абсолютное число эозинофилов составило 0,85±0,01 Г/л, относительное - 8,0±0,46 %) и 19 больных ТЛ без эозинофилии (абсолютное число эозинофилов - 0,29±0,01 Г/л, относительное - 3,0±0,30 %) в возрасте от 18 до 55 лет. Группу сравнения (контроль) составили 12 здоровых доноров с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту. Набор материала для исследования у больных ТЛ во всех случаях проводили до начала специфической противотуберкулезной терапии. Материалом исследования служила венозная кровь. Количественное определение TNF-α проводили в супернатантах культуральных суспензий эозинофильных клеток, предварительно выделенных на прерывистом градиенте плотности Percoll (p=1,133 г/л) («Sigma Life Science», США) с применением твердофазного иммуноферментного «сэндвичевого» метода (ELISA). Для стимуляции цитокинпродуцирующей активности эозинофилов в пробы вносили вакцинный штамм BCG в дозе 50 мкг/мл (ФГУП «НПО Микроген»). Результаты исследования обрабатывали с использованием стандартного пакета программ Statistica 6.0.

Результаты: cогласно современным представлениям, туберкулезная инфекция характеризуется пониженной продукцией TNF-α мононуклеарными лейкоцитами крови, альвеолярными макрофагами, макрофагами из плеврального экссудата и другими клетками, что в большинстве случаев соответствует неблагоприятной динамике инфекционного процесса [4]. В настоящем исследовании мы предприняли попытку оценить у больных ТЛ способность эозинофилов периферической крови секретировать TNF-α. Так, у обследованных больных вне зависимости от наличия гемической эозинофилии базальная продукция данного цитокина оказалась достоверно выше аналогичных параметров в контрольной группе. При этом наиболее выраженные ее изменения были зарегистрированы при туберкулезной инфекции, ассоциированной с эозинофилией, что согласуется с данными литературы, характеризующими способность TNF-α пролонгировать пребывание эозинофилов в периферической крови путем усиления секреции GM-CSF через транслокацию ядерного фактора NF-κB [5]. Прибегая к различным модификациям эксперимента, можно оценить не только базальную секрецию медиаторов, отражающую общее состояние функциональной активности клеток, но и индуцированную митогенами продукцию, которая свидетельствует о резервной реактивности клеток. В качестве индуктора мы использовали  вакцинный штамм BCG (живой аттенуированный штамм M.bovis), выбор которого был обусловлен способностью лейкоцитов эозинофильного ряда непосредственно взаимодействовать с микобактериями различных видов, с последующим высвобождением широкого спектра факторов. В результате проведенного нами исследования было установлено достоверное повышение уровня BCG-индуцированной секреции TNF-α in vitro у больных туберкулезом легких с эозинофилией, что на наш взгляд, свидетельствует о повышенной резервной реактивности эозинофильных клеток, способных реализовывать свой функциональный потенциал в регуляции процессов адаптивного противотуберкулезного иммунитета. В целом, эозинофильные гранулоциты, секретирующие столь значимый противотуберкулезный фактор, по всей видимости, способны вносить вклад в общий цитокиновый дисбаланс, формирующийся при туберкулезной инфекции.

Выводы:

1. У пациентов с ТЛ вне зависимости от наличия эозинофильной реакции  крови  установлена повышенная базальная продукция TNF-α эозинофилами периферической крови in vitro.
2. У больных ТЛ с эозинофилией уровень базальной и BCG-индуцированной секреции TNF-α эозинофильными гранулоцитами in vitro выше, чем у больных ТЛ без эозинофилии.