|
Сибирский
государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра нормальной
физиологии
НИИ психического
здоровья СО РАМН, г. Томск
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 71-й итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 14-16 мая 2012 г.), под ред. В. В. Новицкого, Н.В. Рязанцевой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2012. − 335 с.
Скачать сборник (MS Word, 1 мб)
Скачать программу конференции
Актуальность. Шизофрения – полиморфное
психическое расстройство, связанное с дезинтеграцией процессов мышления и
эмоциональных реакций.
Важными
патогенными факторами, по предположительным данным являются генетическая
предрасположенность, условия жизни в раннем детстве, нейробиологические нарушения,
психологические и социальные взаимодействия. Нарушение белкового обмена выдвигается
многими исследователями в качестве узлового патогенетического звена при шизофрении.
И хотя ошибка закодирована в геноме, ее последствия проявляются на уровне
белка, а не на уровне самого гена. Однако прямых доказательств указывающих на
наличие ключевого регуляторного белка шизофрении либо белка, являющегося
маркёром этой болезни, нет. Поэтому для шизофрении актуален поиск специфических
для этого заболевания изменений в распределении белков плазмы крови при
электрофоретическом разделении.
Цель. Произвести сравнение разделения
белков плазмы крови с помощью методов одномерного и двухмерного электрофореза у
больных шизофренией и здоровых лиц.
Материал и методы. В работе
проанализирован белковый спектр плазмы крови 35 человек. 20 человек из
обследованных находились на лечении в отделении эндогенных расстройств НИИ
психического здоровья СО РАМН г. Томска. Группу контроля составили 15
психически и соматически здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту с
исследуемой группой.
Исследуемые
образцы подвергались аффинной хроматографии на хроматографе с целью удаления 6
основных мажорных белков. Фракции белков, не связавшиеся с аффинным сорбентом,
после предварительной концентрации анализировали двумя способами: вертикальным
электрофорезом в полиакриламидном геле по методу Лемми и двумерным электрофоретическим
разделением (изоэлектрофокусирование). Анализ и обработку электрофоретических
гелей проводили с помощью системы гель-визуализации Alliance 2.7 Uvittc (Cambridge). Статистическую обработку
результатов исследования проводили с использованием программы STATISTIСA 6.0. Достоверность различий между
группами определяли с помощью точного критерия Фишера с поправкой Йетса.
Статистически значимыми считались различия при р < 0,05.
Результаты. Белки сыворотки крови
разделяли с помощью двух методов электрофореза. При использовании метода
одномерного электрофореза после замыкания цепи белок начнет двигаться в
направлении положительного электрода. В порах полиакриламидного геля, действующего
как молекулярное сито, большие молекулы тормозятся сильнее, чем малые и оказываются
ближе к стартовой линии. Смесь белков делится на ряд полос, расположенных в
соответствии с их молекулярной массой. Недостатком вертикального электрофореза
является то, что близко расположенные полосы в геле могут перекрываться. Это
препятствует выявлению большого количества белков (не больше 50) с помощью
одномерных методов их разделения.
Преимуществом
метода двумерного гель-электрофореза, является объединение двух различных
процедур разделения, что позволяет идентифицировать более 1000 белков. После
солюбилизации, денатурации и диссоциация полипептидных цепей белки разделяют
методом изоэлектрического фокусирования. При этом белки подвергаются
электрофорезу в геле, в котором создается градиент рН. Каждый белок
перемещается в ту зону градиента, которая соответствует его изоэлектрической
точке. На втором этапе гель, содержащий разделенные белки, снова подвергается
электрофорезу в направлении перпендикулярном тому, что на первом этапе. В
конечном итоге, после окраски, каждый белок идентифицируется на своём, только
ему свойственном месте, что делает картину выявляемых изменений наглядной и легко
читаемой.
По
результатам электрофоретического разделения белков плазмы крови пациентов с диагнозом
шизофрения и здоровых людей выявлены достоверные различия в распределении белков,
лежащие в соответствующих областях молекулярных масс: 254; 234; 197; 114-100;
97; 94; 87; 66; 59; 32; 29; 23 кDа.
|
