Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра патофизиологии

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 68-й научной итоговой студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 20-22 апреля, 2009 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,5 мб)

 

Одной из актуальных проблем современной медицины является герпетическая инфекция. Вирусы простого герпеса являются одними из наиболее распространённых в популяции, обладают пантропнизмом ко всем клеткам организма. При этом вирусы способны длительно персистировать в организме, формируя нестерильный иммунитет [1]. Одним из ключевых патогенетических звеньев в активации герпесвирусов является ослабление резистентности макроорганизма на фоне депрессии Т-клеточного иммунитета. Однако, и нормально функционирующая иммунная система не только не гарантирует защиты от клинически значимой персистенции вирусов, но и непосредственно участвует в реализации ее патогенетического потенциала [3].
Характер течения, частоту и интенсивность рецидивов герпетической инфекции  в значительной степени определяет именно состояние клеточного иммунитета, опосредованного Т-лимфоцитами. Один из важнейших механизмов, посредством которого Т-лимфоциты участвуют в защите от герпетической инфекции, связан с продукцией этими клетками иммунорегуляторных цитокинов, в частности интерлейкина (IL)-4 [4].  Противовоспалительный IL-4, являясь продуктом CD4+-Т-лимфоцитов с фенотипом Th2, являясь антагонистом Т-активирующих цитокинов, способствует поляризации иммунного ответа в направлении гуморального типа реагирования. Основная функция IL-4 – контроль пролиферации, дифференцировки и функций В-лимфоцитов [3]. Известно, что полиморфизм С-590Т в промоторном регионе гена IL4 определяет уровень продукции IL-4, промотор с заменой -590Т является более активным, менее прочно связывается с транскрипционными факторами, а ген IL4 чаще подвергается транскрипции. В конечном итоге гуморальный иммунный ответ становится ведущей стратегией реализации специфической реакции на антиген [2].
В связи с этим, целью данного исследования явилось изучение распределения аллельных вариантов промоторного региона гена IL4, а также степени их ассоциированности с уровнем продукции соответствующего белкового продукта у пациентов с герпетической инфекцией.
В программу исследования вошли 80 пациентов (32 мужчины и 48 женщин в возрасте от 18 до 50 лет) с хронической герпетической инфекцией. Все пациенты были обследованы до начала проведения терапии. Контрольную группу составили 82 практически здоровых донора с аналогичными характеристиками по полу и возрасту. Исследовали стабилизированную венозную кровь, взятую утром до приема пищи. Концентрацию IL-4 определяли в культуральных жидкостях. Содержание цитокина в супернатантах оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с инструкцией, прилагаемой производителем тест-систем («Cytimmune», США). Выделение ДНК из периферической крови проводили сорбентным методом с помощью набора «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфных участков генов цитокина проводили с использованием рестрикционного анализа продуктов амплификации специфических участков генома (ПДРФ-анализ). Был исследован полиморфный вариант С-590Т гена цитокина IL4. Амплификацию осуществляли с помощью набора «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия), путём ПЦР, используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в литературе. Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по U-критерию Манна-Уитни. Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с герпетической инфекцией сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах больных и здоровых индивидов, используя критерий ?2 с поправкой Йетса на непрерывность. Об ассоциации разных генотипов с заболеванием судили по величине отношения шансов (odds ratio (OR)).
Как показало проведенное нами исследование, у пациентов с герпетической инфекцией отмечалось увеличение (р<0,01) продукции мононуклеарами крови противовоспалительного IL-4 по сравнению с соответствующими показателями у здоровых доноров. В ходе иммуногенетического исследования для полиморфизма C-590T гена IL4 среди здоровых лиц было выявлено преобладание гетерозиготного генотипа CT (70,4%) над гомозиготными вариантами CC (25,3%) и ТТ (4,3%). Анализ частоты встречаемости аллельных вариантов гена IL4 среди пациентов с хронической герпетической инфекцией показал аналогичный характер распределения. Так, генотип СС промоторного региона C-590T гена IL4 встречался у 45% обследованных, вариант ТТ – у 5%. Преобладающим, также как и у здоровых доноров, оказался гетерозиготный генотип СТ (50%). Зарегистрированное нами у пациентов с герпетической инфекцией увеличение частоты генотипа СС (?2=3,01; р<0,05), по сравнению с аналогичными параметрами у здоровых лиц указывало на его положительную ассоциацию (ОR=2,420) с риском дальнейшего прогрессирования и прогредиентного течения заболевания. Аллель С также был положительно ассоциирован с риском хронизации и рецидивирующего течения герпетической инфекции (ОR=1,529).
В связи с тем, что замена нуклеотида локализована в промоторной области гена IL4, можно предположить, что ее фенотипический эффект может заключаться в изменении экспрессии гена и, следовательно, уровня его посттрансляционного продукта. Результаты проведенного нами исследования ассоциированности генотипа клеток-продуцентов IL-4 с уровнем его спонтанной продукции позволили установить, что среди индивидов с повышенным уровнем продукции цитокина преобладает гомозиготный СС генотип промоторного региона C-590T гена IL4.
Таким образом, степень риска прогрессирования, рецидивирующего течения и неблагоприятного исхода герпетической инфекции положительно ассоциирована с гомозиготным генотипом СС  и аллелем С промоторного региона C-590T гена IL4.

Список литературы:
1.    Львов, Д. К. Актуальные проблемы герпесвирусных инфекций. / Д. К. Львов, И. Ф. Баринский,  М. М. Гараев, Л. М. Алимбарова. – М. : Медицина, 2004. – 125 с.
2.    Hegazy D., Thurairajah P., Metzer M. et al. // Clin. Exp. Immunol. - 2008. –Vol. 2. – P. 113-123.
3.    Lieberman L. A., Hunter C. A.  // Microbes. Infect. – 2002. – Vol. 4. – P. 1531-1538.
4.    Reading P. C., Whitney P. G., Barr D. P. et al. // J. Immunol. 2007. – Vol. 179. – №5. – P. 3214-3221.